| 研究概要 |
興奮性細胞に広く分布するリアノジン受容体は細胞内カルシウムチャネルとして機能する。しかし、3種存在するリアノジン受容体の生理的存在意義やリアノジン受容体一次構造中の分子内機能部位に関する知見に乏しく、その解析が急務である。一方、リアノジン受容体は細胞内存在部位がその生理機能に重要であると示唆されており、特に骨格筋におけるリアノジン受容体の存在部位である三つ組構造の分子構築も注目される。(i)リアノジン受容体の生理機能と(ii)分子内機能部位、(iii)骨格筋三つ組構造の分子構築の3点を重点課題として本研究は遂行された。以下に記載した平成9、10年度に明らかにされた研究結果を記述する。
(i) 1、3型リアノジン受容体ノックアウトの解析などから、両サブタイプの骨格筋発生分化や収縮における機能を明らかにした。2型リアノジン受容体ノックアウトマウスの作製と解析から、発達中の心筋細胞において細胞内ストアのカルシウム濃度調節に2型リアノジン受容体が必須であることが示された。
(ii) リアノジン受容体の分子内に存在するチャネル形成部位、チャネル不活性化に関与するカルシウム結合部位の同定を行った。リアノジン受容体のカルボキシル末端側約1/5の部分のみで、基本的なカルシウム放出チャネル活性が規定されること、1型リアノジン受容体の分子内に存在するD3部位と呼ばれる領域が不活性化カルシウムの結合部位の一部であることが明らかにされた。
(iii) 骨格筋三つ組構造の形成に寄与する分子の同定を目指し、そこに存在する新規膜蛋白質の同定を行った。mitsugumin29,mitsugumin23と名付けた新規膜蛋白を単クローン抗体により同定し、cDNAクローニングによりそれぞれの一次構造を明らかにし、併せて組織分布なども解析した。
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