上皮細胞に発現する新たなEBウイルスレセプターの遺伝子クローニング

1998 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 09470080
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 高田 賢蔵 北海道大学, 医学部, 教授 (30133721)
• 研究分担者: 今井 章介 北海道大学, 医学部, 助教授 (60232592)
• 研究期間 (年度): 1997 – 1998
• キーワード: EBウイルス / 上皮細胞 / ウイルスレセプター / CD21

研究概要

EBウイルス(EBV)の上皮細胞への感染を簡便にモニターするために、蛍光蛋白Enhanced green fluorescent protein(EGFP)遺伝子を組み込んだ組み換えEBV(EGFP―EBV)を作製した。このウイルスを用いた検討により、いくつかのヒト上皮細胞株がEBV感染感受性を有することを明らかにした。これらの上皮細胞株は、これまでに知られているEBVレセプター(CD21)をほとんど発現していなかった。さらに抗CD21抗体を用いたプロッキング実験により、上皮細胞への感染がCD21以外の分子をレセプターとして成立することを証明した。
次に、CD21に結合するウイルス側のリガンドgp350/220とヒトIgG1Fc部分との融合蛋白gp350/220-Igを作製した。この融合室白はCD21を発現するB細胞株に強く結合したが、上皮細胞株にはほとんど結合しなかった。一方、他のウイルス粘蜜白gp25とヒトIgG1Fc部分との融合蜜白gp25-Igは、 B細胞株にはほとんど結合せずEBV感染感受性の高い上皮細胞株に強く結合した。この結果から、上皮細胞に発現するEBVレセプターに結合するウイルス側のリガンド分子はgp25であると考えられた。
種々のgp25分子の欠失変異体を作製することにより、gp25分子中の上皮細胞への結合に必要な領域を決定した。その結果、アミノ酸71-100の領域が上皮細胞への結合に必須であることが明らかとなった。この領域と相同性のある蛋白をBLAST homolgysearchにより検索したところ、脂質二重膜の融合に働くsyntaxin分子との相同性が認められた。Gp25分子はsyntaxin分子と同様に、脂質二重膜の融合機構に組み込まれて働く可能性が示された。

研究成果

• [文献書誌] Komano, J.: "Oncogenic role of Epstein-Barr virus-encoded RNAs(EBERs) in Burkitt's lymphoma cell line Akata"J. Virol.. 73. 9827-9831 (1999)
• [文献書誌] Nishikawa, J.: "EBV promotes epithelial cell growth in the absence of EBNA2 and LMPI expression"J. Virol.. 73. 1286-1292 (1999)
• [文献書誌] Sugawara, Y.: "Enhancement of hepatitis C virus replication by Epstein-Barr virus-encoded nuclear antigen"ENBO J.. 18. 5755-5760 (1999)
• [文献書誌] Sugawara, Y.: "Detection of EBV in hepatocellular carcinoma tissue: a vovel EBV latency characterized by absence of EBER expression"Virology. 256. 196-202 (1999)
• [文献書誌] Takada, K.: "Epstein-Barr virus and gastric carcinoma (Review)"Epstein=Barr Virus Report. 6. 95-100 (1999)
• [文献書誌] Sugawara, Y.: "Detection of hepatitis B virus (HBV) DNA in the tissues of hepatocellular carcinomas related to hepatitis C virus that are negative for HBV surface antigen"Scand. J. Gastroenterol. 34. 934-938 (1999)