| 研究課題/領域番号 |
09470145
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
呼吸器内科学
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
八重柏 政宏 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (70261477)
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| 研究分担者 |
中村 敏一 大阪大学, 医学部, 教授 (00049397)
佐藤 研 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (00215782)
貫和 敏博 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (40129036)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| キーワード | HGF / 遺伝子導入 / 肺線維症 / 遺伝子治療 / ブレオマイシン |
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| 研究概要 |
1. 目的
近年肝再生因子として研究分担者中村らによって同定クローニングされた肝細胞増殖因子(Hepatocyte growth factor:HGF)は、組織修復に関与するサイトカインである事が報告され、多機能器官再生因子であると認識されている。本研究は分子生物学的手法によって導入されたHGF遺伝子の発現を安定化することによりHGFの生体内での発現を適切な量とし、疾患治療をより有効に導くことを目的とする。
2. 方法
(1) 培養細胞にヒトHGFcDNAを遺伝子導入し、HGF発現の検討を行った。
(2) マウスにラットHGFcDNA組み込みアデノウイルスベクターを用いてin vivoの遺伝子導入を行い、HGFの発現を検討した。また、ブレオマイシン(BLM)による肺線維化モデルマウスにアデノウイルスベクターを用いたHGF遺伝子導入を行い、線維化の治療効果を検討した。
(3) HGFによる動物肺線維症治療実験を行い、その作用機序を検討した。
3. 結果
(1) 培養細胞(A549細胞、293細胞)にpCI-neo Mammalian Expression vectorを用いてヒトHGFcDNAを遺伝子導入し、培養上清及び細胞内に導入HGFが発現していることを確認した。この細胞においてHGFの発現は比較的安定して見られた。
(2) アデノウイルスベクターを用いた腹腔への遺伝子導入では、肝臓に強いHGFの発現がmRNA・蛋白ともに認められ、臓器内HGF濃度は投与3日後にピーク(286.0 ng/g-tissue)を示し7日目に前値近くまで低下した(111.9 ng/g-tissue)。肺においても同様の傾向を示した。アデノウイルスベクター投与によりBLMによる肺線維化は著明に抑制された。
(3) HGFは肺胞上皮細胞に対し抗アポトーシス作用を示し、またin vivoにおいて抗TGF-β1作用を示した。
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