| 研究概要 |
1) eNOS, iNOSの遺伝子導入 今年度は、in vivoでのNOS遺伝子導入のための予備実験として、培養牛胎児平滑筋及び胸部大動脈標本にeNOS, iNOSのベクターを導入し、mRNA量、蛋白量、活性を測定した。
2) eNOS, iNOSそれぞれに構造機能解析を用いてcalmodulin結合部位を有しないミュータントを作製し、2量体形成時に活性を調節する手技を確立した。 eNOS, iNOSのcalmodulin binding siteに着目しこれを欠失したミュータントを構造機能解析的に形成し,2量体形成時に,ホモ(calmodulin結合能欠失,不活型ホモ)又は活性を持つ野生型とのヘテロ型(不活型ヘテロ)をワタナベらの方法により作製した。
3)進行動脈硬化病変を,病変の個体差をなくすために、血管内超音波を用い評価を行った。
1%コレステロール食負荷家兎及び普通食負荷同家兎を用い、飼育時に腹部大動脈及び大腿動脈をバルーン擦過しさらなる内膜肥厚をはかる。本年は雄性群を用い、バルーン擦過12週後、血清脂質測定後、血管内超音波検査を施行した。大腿動脈よりガイドワイヤー下に2.9Fr血管内超音波用カテーテルを挿入し動脈硬化病変を検索した。
4)病態評価を,細胞薬理、分子生物学,超微細免疫形態学から行い、退縮のキ-ポイントを探った。 NO関連血管反応性,NO分泌能,NO合成酵素活性,転写レベルの調節機構と,免疫電顕による形態評価を行った。転写レベルの調節機構は、血管壁をhomogenateしtotal RNAを抽出、RT-PCR法により、eNOS, iNOSそれぞれのmRNAを測定することから、開始した。免疫電顕により、高脂肪食負荷動脈硬化家兎大動脈病変内のマクロファージ系細胞のミトコンドリアにiNOSの特異的発現を認めた。
|
