血管新生抑制を標的としたヘパリン結合性増殖因子結合能をもつオリゴ核酸の分子設計

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09470172
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 北島 勲 鹿児島大学, 医学部, 助教授 (50214797)
• 研究分担者: 明石 満 鹿児島大学, 工学部, 教授 (20145460) ; 丸山 征郎 鹿児島大学, 医学部, 教授 (20082282)
• キーワード: 血管新生 / オリゴ核酸 / ホスフォロチオエート / bFGF / NF-kB / 角膜血管 / 管腔形成 / アンチセンス核酸

研究概要

アンチセンス核酸を利用した血管新生抑制法開発の研究が世界的に進められている。本年度、われわれは、過去に血管新生抑制効果が確認されているbFGF,VEGF,NF-kBp65に対するアンチセンスオリゴ核酸を合成し、ホスフォロチオエート化(S化)修飾したものと、ジエステル化(d化)したものの効果をin vitroとin vivoで比較した。マトリゲル上の血管内皮細胞の管腔形成能に対する抑制効果を画像解析装置を用いて定量的に検討した。その結果、bFGF存在下の血管新生は塩基配列に関係なくS化したオリゴ核酸で抑制された。次にウサギ眼球にコンタクトレンズを装着し、bFGFを注入しin vivoにおける血管新生誘導実験を行った。
右目はbFGFのみ、左目はbFGFと各オリゴ核酸を混合したものを注入し新生血管の本数、長さを定量的に検討した。その結果、S化オリゴ核酸はすべてbFGF誘導による血管新生を抑制する作用を有するが、最も強い抑制効果を示したものはS化アンチセンスbFGFオリゴ核酸であった。また、GGGG配列を有するアンチセンスNF-kBp65オリゴ核酸も非常に強い血管新生抑制効果を示した。以上、血管新生に対するオリゴ核酸の効果は、昨年度われわれが明らかにしたS化することによるチャージ作用による直接的bFGF結合作用に加え、bFGF発現抑制というアンチセンス効果も重要であることが本年度の研究で明らかになった。今後、本ウサギ角膜血管新生モデルに加えアルビノラットの光刺激による網膜血管作用の実験系を加え、in vivo系で最強の血管新生抑制能をもつアンチセンス核酸の分子を検討してゆく予定である。

研究成果

• [文献書誌] Kenji Takahashi,Isao Kitajima,: "Hydrostatic pressure induces expression of interleukin 6 and THF-α mRNA in a chondrocyte like cell line." Annal.Rheum.Dis.57. 231-236 (1998)
• [文献書誌] Nobuaki Maeno,Isao Kitajima,: "Increased serum levels of vascular endothelial growth factor in Kawasaki disease." Pediatric Res.44. 596-599 (1998)
• [文献書誌] Osamu Watanabe,Isao Kitajima,: "Overproduction of vascular endothelial growth factor/vascular permiability factor causative in CROW-FUKASA(POEMS)syndrome." Muscle Nerve. 21. 1390-1397 (1998)
• [文献書誌] Toshikazu Kudo,Isao Kitajima,: "Interleukin 8 is produced by hydrostatic pressure in human osteoblast cell line MG63." Pathophysiology. 5. 199-204 (1998)
• [文献書誌] Gen Yamada,Isao Kitajima: "Dysregulation of trace element composition in ovariectomized cynomolgus monkey bones." Cell.Mol.Biol.44. 1205-1213 (1998)
• [文献書誌] Isao Kitajima,Kazujiko Unoki,: "Phosphorothioate oligodeoxynucleotides inhibit basic fibroblast growth factor-induced angiogenesis in vitro and in vivo." Antisense and Nucleic Acid Drug Development. (in press).
• [文献書誌] 北島勲,丸山征郎: "VEGF血管,リンパ管形成, 細胞増殖因子の作用と疾患" 羊土社, 124 (1998)
• [文献書誌] 北島勲,丸山征郎: "NOと骨代謝,心血管病態とNO" 金芳堂, 210 (1998)