一酸化窒素(NO)の生体内挙動解析とNOによる細胞障害メカニズムの解明

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09470174
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 中澤 博江 東海大学, 医学部, 教授 (20110885)
• 研究分担者: 一守 康史 東海大学, 医学部, 講師 (60184636) ; 石田 英之 東海大学, 医学部, 講師 (20222424)
• キーワード: 一酸化窒素 / スーパーオキサイド / パーオキシナイトライト / 細胞障害 / 脳虚血 / エンドトキシンショック

研究概要

1)NO合成酵素の化学反応機構の検討を行った。NADPHは340nm吸収で、酸素消費量は酸素電極、NOヘム化合物を421nm吸光度変化、アルギニン、シトルリンはHPLCで測定した。NOはNO電極とGriess法によるNO2-とまたESRスペクトル及び共鳴ラマンスペクトルで測定した。この結果NO合成酵素の酸化酵素部位と還元酵素部位にヘムを加えると2量体になるがBH4の存在下にはじめて活性を発現しNO自身が生成されることが明らかになった。
2)脳虚血再灌流障害におけるNO、スーパーオキサイド、ONOO-の関与をラットを用いて検討した。健常脳組織ではニトロチロシンは存在しなかったが、虚血のみの群と再灌流された群では脳の梗塞部と梗塞周辺部でニトロチロシンが生成されることが示された。ニトロタイロシン量は虚血のみの群より再灌流群で高値であった。また再灌流後の脳血流の増加部に高値であった。この生成は、NOの生成阻害剤を投与した群では認められなかった。(Peroxynitrite formation in rat transient focal ischemia.J Cereb Blood Flow Metab.)
3)エンドトキシンショック時の肺障害についてラットを用いて検討した。障害にはスーパーオキサイドが関与しており、NOは増悪因子であった。(The importance of polymorphnuclear leukocytes in lipopolysaccharide-induced superoxide anion production and lung injury.Lung.)
4)通年性アレルギー性鼻炎患者の鼻粘膜ではNO生成が増加しているにもかかわらず、血流の低下がありONOO-生成があることを示すことが出来た。(Increased nitric oxide in nasal lavage fluid and nitrotyrosine formation in nasal mucosa--Indices for severe perennial nasal allergy.Clinical and Experimental Allergy)

研究成果

• [文献書誌] Sato M,et al.: "Increased nitric oxide in nasal lavage fluid and nitrotyrosin formation in nasal mucosa--Indices for sever perennial nasal allergy." Clinical and Experimental Allergy. (in press). (1998)
• [文献書誌] Tsuji C,et al.: "The importance of polymorphnuclear leukocytes in lipopolysaccharide-induced superoxide anionproduction and lung injury." Lung. in press (1998)
• [文献書誌] Fukahori M,et al: "Early reperfusion induces alveolar injury in pulmonary embolism." Chest. 111. 198-203 (1997)
• [文献書誌] Fujii H,et al: "NO inactivates NADPH oxidase in pig neutrophils by inhibiting its assembling process." J Biol Chem. 272. 32773-32778 (1997)
• [文献書誌] Tanaka K,et al: "Nitric oxide mediates murine cytomegalovirus-associated pneumonitis in the lunfs that are free of the virus." J Clin Invest. 100. 1822-1830 (1997)
• [文献書誌] Fukuyama N,et al: "Peroxynitrite formation in rat transient focal ischemia." J Cereb Blood Flow Metab. (in press). (1998)
• [文献書誌] Ishida H,Minhaz U,et al.: "Interaction of Superoxide,Nitric Oxide,and Peroxynitrite under Various Pathological Conditions." Japan Sci.Soc.Press, 12 (1998)