| 研究概要 |
これまでの実験結果より、dexmedetomidineはα2A adrenoceptor上のTMD#2,6,7にbinding sitesを有していることが判明した。
平成10年度はこの結果を踏まえ、mismatched primerを使ったPCRによりpoint mutationを行ったmutant receptorを作成しTMD#2,6上のbinding site(binding amino acid)を同定すべく実験を行った。
β2 adrenoceptorを用い、この細胞膜貫通領域(transmembrane domain:TMD)の第2、第6のアミノ酸を1つずつ対応するα2A adrenoceptorのアミノ酸に換えた。
すなわち、TMD#2の細胞外側3分の1のアミノ酸、87,90,91,93,94,95をそれぞれ対応するa2A adrenoceptorのアミノ酸に換えたmutant receptorを6つ作成した。
これらの3H-DHAに対するKd値は0.37から0.56でwild typeのβ2 adrenoceptorのそれと(0.33)有意な差はなかった。これらmutant receptorのdexmedetomidineに対するKi値は2.605x10^<-4>から5.583x10^<-4>であった。
またTMD#6の細胞外側3分の1のアミノ酸,287,291,292,293,294,295,296をそれぞれ対応するα2A adrenoceptorのアミノ酸に換えたmutant receptorを7つ作成した。これらの3H-DHAに対するKd値は0.155から0.91でwild typeのβ2 adrenoceptorのそれと(0.33)有意な差はなかった。これらmutant receptorのdexmedetomidineに対するKi値は1.71x10^<-2>から1.527x10^<-4>であった。
以上よりこれらの部位にはdexmedetomidineのbinding siteはないと考えられる。
平成11年度は、TMD#2,6の内側のアミノ酸の置換と、α2A adrenoceptorを用いたmutant receptorを作成しdexmedetomidineのbinding siteを同定する予定である。
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