細胞生理-分子生物学的手法による血管条のイオンチャネル-輸送体の機能発現の解析

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09470367
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 池田 勝久 東北大学, 医学部, 講師 (70159614)
• 研究分担者: 大島 猛史 東北大学, 医学部, 助手 (40241608) ; 志賀 伸之 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (10215957)
• キーワード: 血管条 / イオン輸送 / チャネル / 輸送体 / クローニング

研究概要

1)チャネル蛋白によるイオン輸送
摘出した血管条、ラセン靱帯、外側壁上皮細胞にパッチクランプ法によりチャネル解析を施行し、また電位感受性色素や細胞内Ca^<2+>色素を負荷し、脱分極刺激による電位変化または細胞内Ca^<2+>濃度変化を共焦点レーザー蛍光顕微鏡を用いた顕微画像解析装置により測定し、Caチャネルやアゴニストの受容体の局在を解明した。またアセチルコリン、ATP、バゾプレシン、NOなどの神経伝達物質を投与し、同様な観察を行なった。
2)担体蛋白によるイオン輸送
摘出した血管条、ラセン靱帯、外側壁上皮細胞に細胞内Ca^<2+>、Na^+、pH色素を負荷し細胞外のイオン組成を変えることによって種々の担体蛋白系(Naポンプ、Na-Ca交換輸送、Na-H交換輸送、Cl-HCO_3交換輸送、Na-K-Cl共輸送を活性化して、共焦点レーザー蛍光顕微鏡を用いた顕微画像解析装置により測定し担体蛋白の局在を解明した。またアセチルコリン、ATP、バゾプレシン、NOなどの神経伝達物質を投与し、同様な観察を行なった。
3)RT-PCRによるmRNAの発現とin situ hybridizationによる局在
1〜2の細胞生理学的手法によって機能の発現が同定されたチャネル蛋白や輸送体蛋白の一次構造からdegenerate PCRプライマーを設計し、内耳の外側壁上皮からmRNAを抽出してcDNAを作製し、RT-PCRを行った。PCR産物の塩基配列をDNA塩基配列解析装置により求めた。そのcDNAプローブよりcRNAプローブを作製して、蝸牛においてin situ hybridizationを行ない、発現細胞を同定した。

研究成果

• [文献書誌] Ikeda K: "Invease Cl^- secretion induced by Kampo Medicine" Jpn J Pharm. 73. 29-32 (1997)
• [文献書誌] Ikeda K: "Lasor-assisted uvulopalatoplasty for habitual" ORL. 59. 45-49 (1997)
• [文献書誌] Suzuki H: "Age-related changes of the globular substance" Laryngoscope. 107. 378-381 (1997)
• [文献書誌] Ikeda K: "Restoration of the mucociliary clearance" J Allargy Clin Immunol. 99. 48-52 (1997)
• [文献書誌] Furukawa M: "Effects of extracellular ATP on ion transport" Am J Physiol. 272. C827-C836 (1997)
• [文献書誌] Oshima T: "Expression of voltage-dependent" Hear Res. 103. 63-68 (1997)
• [文献書誌] Ikeda K: "Endonasal endoscopic management" Am J Otolaryngol. 18. 415-418 (1997)
• [文献書誌] Suzuki H: "Effects of long-term low-dose macrolide" Tohoku J Exp Med. 182. 115-124 (1997)
• [文献書誌] Ikeda K: "Unilateral sinonasal disease without bone" Archiv Otolaryngel Head & Neck Surg. 123. 198-200 (1997)
• [文献書誌] Ikeda K: "Molecular and clinical implications" Hear Res. 107. 1-8 (1997)
• [文献書誌] Oshima: "Alternatively spliced isoforms of the Na/Ca" BBRC. 233. 737-741 (1997)
• [文献書誌] Goto S: "Expression and localization of the Na-K-2Cl" Brain Res. 765. 324-326 (1997)
• [文献書誌] Suzuki H: "Inhibitory effect of macrolides" Laryngoscope. 107. 1661-1666 (1997)
• [文献書誌] Suzuki H: "Pzy purinergic receptor of the Jobular" Am J Physiol. 273. C1533-C1540 (1997)
• [文献書誌] Shimomura A: "The expression of adhesion molecules" Laryngoscope. 107. 1519-1524 (1997)
• [文献書誌] Furukawa M: "Az-adenosine receptas in Mongolian" Acta Physiol Scand. (印刷中).
• [文献書誌] Ikeda K: "A case of leiomyosarcoma" Tohoku J Exp Med. 182. 265-270 (1997)