新たに見い出した抗糖尿病薬結合タンパク質の構造と新しい機能,疾患との関連性の追求

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09470513
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 中山 仁 熊本大学, 薬学部, 教授 (70088863)
• 研究分担者: 國安 明彦 熊本大学, 薬学部, 教務員 (90241348) ; 甲斐 広文 熊本大学, 薬学部, 助教授 (30194658) ; 石塚 忠男 熊本大学, 薬学部, 助教授 (60176203)
• キーワード: スルホニルウレア / グリベンクラミド / 光アフィニティラベル / マクロファージ / CD36 / ACAT / コレステロール代謝

研究概要

心筋のスルホニルウレア受容体(SUR)を解析すべく、そのリガンド[^3H]-glibenclamide(GB)により光アフィニテイラベルを行ったところ、SUR2遺伝子の翻訳産物とは異なるタンパクとしてCD36と酷似した分子を見いだしたことが本研究の発端であるが、本年度はこれを基に研究の展開を図った。得られた成果を以下に述べる。
(1) まず、CD36機能へのGBの効果を、本遺伝子をトランスフェクトしたCHO細胞および対照としてスカベンジャー受容体Aを発現させたCHO細胞を用いて詳しくて解析した。その結果、GBは、酸化LDLのCD36分子への結合および本分子を介した細胞内への取り込みを濃度依存的に阻害することが確認された。
(2) また、マクロファージにおいてGBは、コレステロール代謝に深く関わるキー酵素ACATの活性をも阻害するとの興味深い知見が初めて得られた。
(3) 本研究の発端となった心筋のCD36を認識するモノクローナル抗体を作製した。得られたいくつかのクローンは、ヒトのマクロファージや血小版に発現するCD36とは交差反応をせず、また心筋組織でもウサギやラットとは交差しないことがわかった。したがって、CD36分子は種差のみならず、発現組織においても分子型に違いがあることを強く示唆しており、興味深い。
(4) 脂肪細胞においても、GBはCD36(=FAT)を介すると考えられる中鎖脂肪酸・オレイン酸の細胞内取り込みを阻害した。

研究成果

• [文献書誌] A.Kuniyasu,et al.: "photochemical identification of transmembrane segment TVS6 as the binding region of semotiadil for the Ca^<2+> channel." J.Biol.Chem.273. 4635-4641 (1998)
• [文献書誌] K.Anzai,et al.: "Effects of hydroxyl radical and sulfhydryl reagents on the open probability on the purified cardiac ryanodine receptor." Biochem.Biophys.Res.Commun.249. 938-942 (1998)
• [文献書誌] M.Ohkura,et al.: "Dual regulation of the skeletal muscle ryanodine receptors by tridin and calsequestrin." Biochemistry. 37. 12987-12993 (1998)
• [文献書誌] N.Ii,et al.: "Photochemical localization of the semotiadil binding region within cardiac Ca^<2+> channel α1 subunit." FEBS Letters. 441. 83-87 (1998)
• [文献書誌] L.-C.Xu,et al.: "Bis(Hydroxamide)-based bifunctional chelating agent for ^<99M> Tc labeling of polypeptides." Bioconjugate chem.10. 9-17 (1999)
• [文献書誌] A.Kuniyasu,et al.: "A new scorpion toxin which stimulaetes the Ca^2± release channel activity of the skeletal muscle ryanodine receptor." Biochem.J.339(in press). (1999)