TFIIF、エロンガンの遺伝子発現制御機能の解析

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09470519
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 北嶋 繁孝 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (30186241)
• 研究分担者: 麻生 悌二郎 筑波大学, 先端学際領域センター, 講師 (20291289) ; 土屋 輝昌 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助手 (20242109) ; 安河 内幸雄 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (60037398)
• キーワード: TFIIF / エロンガン / 転写制御 / p32 / p30 / RNAポリメラーゼIIホロ酵素

研究概要

1。TFIIF機能の解析
(1)TFIIFサブユニットRAP74の中央ドメインと特異的に結合するp32を得た。p32は、核内にも存在するがほとんどがミトコンドリアマトリックスに存在すること、p32のホモログは、ヒトのほかにマウス、線虫、酵母でも認められること、酵母p32ホモログ-p30と命名-のノックアウト株は、呼吸機能の障害がおこりp30がミトコンドリア機能に重要であることがわかった。しかしながら、p32はIIFのほかにも核内蛋白のIIB,ラミン、エイズウイルスの転写因子Tatとも相互作用するので核内転写を制御する可能性がある。実際、転写伸長活性への影響をテストしたところ、p32がIIF活性をTat共存下で促進させる結果を得た。今後、この解析とともにRAP74の他のドメインと結合するクローンのスクリーニングを続ける。
(2)核に存在する細胞障害チェック機構であるDNA依存性リン酸化酵素が、TBP,IIBをリン酸化することがわかった。このリン酸化による転写基本活性を明らかにした。
2。エロンガン機能の解析
(1)エロンガンは活性サブユニットと調節サブユニットで構成されるが、調節サブユニットのホモログ酵母とハエからクローニングしその構造を解析した。これは、エロンガン機能の生物種間での保存を明らかにし、ヒト以外での生物を用いての遺伝学的解析を可能にした。
(2)転写伸長因子であるTFIISとエロンガンのRNAポリメラーゼIIホロ酵素との結合を明らかにした。すなわち、転写伸長型のRNAポリメラーゼIIに伸長因子のIIS.エロンガンも複合体として含まれることがわかった。

研究成果

• [文献書誌] Kamura,T., et al: "Characterization of the human thrombopoieting gene promuter : A possible role of an Ets-transciption foctor E4TF1/GABP" J.Biol.Chem.272. 11361-11368 (1997)
• [文献書誌] Chibazakura,T., et al: "Phosphoyiation of human geneol tronsciption factons TATA-binding protein and IIB by DNA-dependent protein kinare : Synengistic stomelation of RNA poiymeooeII besal trowonppon in vitro" Eur.J.Biochem.247. 1166-1173 (1997)
• [文献書誌] Cai,Y., et al: "Autoantibodies agcuist human general tromeciption initiation factor TFIIF in sera of autoimmune diseases" Clin.Exp.Immunol.109(3). 488-494 (1997)
• [文献書誌] Muta,T., et al: "p32 protein,a splicing foctor 2-associbted protein,is localized in mitochosduial matrix and funetionelly important in mantainirg oxidetive phosphoryletion" J.Biol.Chem.272. 24363-24370 (1997)
• [文献書誌] Aso,T., et al: "Molecular cloning of DNAs encoding the reguletory subunits of Elongin from Sacchoromyces cerevisiae and Drosophila melanogsoter" Biochem.Biophys.Res.Commun.241. 334-340 (1997)
• [文献書誌] Pan,G., et al: "Interaction of elongation factors TFIIS and elongin A uidh a human RNA poiymerae II holoenjyne capable of protein-specific initiation and responave to trorsuiptind activators" J.Biol.Chem.272. 24563-24571 (1997)