| 研究課題/領域番号 |
09470519
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
北嶋 繁孝 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (30186241)
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| 研究分担者 |
大城 聰 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助手 (30160485)
土屋 輝昌 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助手 (20242109)
安河内 幸雄 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (60037398)
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| キーワード | TFIIF / エロンガン / 転写リサイクリング / 組織特異的因子 |
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| 研究概要 |
1.TFIIF機能の解析
昨年度までの研究結果からRAP74サブユニットの3極構造が明らかになったので、それぞれを核内に過剰発現させ、もしin vivoでそれぞれが重要な蛋白因子と相互作用している場合、ドミナントネガテイヴな影響が起きることを想定して、核移行シグナルを付加した蛋白質を過剰発現させた。その細胞でルシフェラーゼ遺伝子によるリポーターアッセイを行った。この結果、RAP74のC-末がリポーター遺伝子活性を抑制することがわかった。このため、C-末領域を用いた2-ハイブリイドスクリーニングをすすめている。この結果と前後してRAP74C-末と結合するFCP1が報告されたが、これは、RNAポリメラーゼIIのCTDフォスファターゼ活性を持ち転写開始とともに終結段階で働き転写のリサイクリングに関与することが示唆された。我々も、FCP1をクローニングして解析をすすめている。
2.精巣特異的エロンガンの同定
エロンガンAは、ラット肝より同定されたubiquitousな転写伸長因子である。我々は、ゲノム配列の相同性から、新規なエロンガンA2を見い出した。A2は、Aとアミノ酸レベルで47%のidentity、61%のsimilarityを有しており極めて類似している。バキュロウイルスを用いて発現させたリコンビナントA2は、A同様、RNAポリメラーゼIIによるmRNA合成伸長反応を促進した。ノーザンブロットによって組織での発現を解析したところ精巣に高い発現を認めた。したがって、エロンガンA2は、Aが組織非特異的であるのに対し精巣特異的転写伸長因子であることがわかった。精巣で転写伸長制御が重要であることを示唆する結果である。
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