脳型ADPリボシールシクラーゼの精製とcDNAクローニング

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09480221
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 東田 陽博 金沢大学, 医学部, 教授 (30093066)
• 研究分担者: 星 直人 金沢大学, 医学部, 助手 (90229170) ; 横山 茂 金沢大学, 医学部, 助教授 (00210633) ; 橋井 美奈子 金沢大学, 医学部, 講師 (10272957)
• キーワード: ADPリボース / サイクリックADPリボース / 環状化酵素 / 心筋 / リアノジン受容体 / NAD

研究概要

神経腫瘍細胞NG108-15細胞のADPリボシルシクラーゼは、ムスカリン受容体たカップルしていたが、脳のADPシボシルシクラーゼは、カップルする受容体が、数多くの試みの中からは検出できなかった。一方、心臓のADPリボシルシクラーゼは、イソプロテレノールやノルアドレナリン刺激により、活性化された。私達の目的は受容体とカップルする膜型ADPシボシルシクラーゼの分子を決めることにあるので、さしあたり、ラット心室心筋を出発材料にすることにした。心筋を細分して低調液で、30分間浸け、テフロンガラスホモゲナイザーで均一化した後、1000g、10分の遠心により核を取り除いた。上澄みを105000g、15分の超遠心にかけ、膜分画を得た。それを2%のトライトンXで可溶化し、105000g、30分にて遠心し沈渣を除いた後、上澄みをDEAEカラムにとうした。ADPリボシルシクラーゼ活性は、DEAEカラムを1M NaClを溶出すると、タンパクのピークと一致して検出できた。この分画をさらにゲル濾過すると、アルブミンの溶出よりも少し分子量の低い分画にADPリボシルシクラーゼ活性が回収できた。単一タンパクまでさらに精製を続ける。

研究成果

• [文献書誌] Higashida ,H.et al.: "Endomorphins inhibit high-treshold Ca^<2+> channel currents in rodent NG108-15 cells overexpressing m-opioid receptors." J.Physiol.(London). 507. 71-75 (1998)
• [文献書誌] Ishizaka,N.et al.: "Muscarinic acetylcholine receptors subtypes in the human iris." Brain Res.787. 344-347 (1998)
• [文献書誌] Furukawa,T.et al.: "Differential interactions of the C teminus and the cytoplasmic I-II loop of neuronal Ca^<2+> channels with G-protein α and βγ subunits." J.Biol.Chem.273. 17595-17603 (1998)
• [文献書誌] Hoshi,N.et al.: "KCR1: a membrane protein that facilitates functional expression of non-inactivating K^+ currents associates with rat EAG voltage-dependent K^+ channels." J.Biol.Chem.273. 23080-23085 (1998)