| 研究概要 |
1. 抗PSD抗体を作成しラット大脳のcDNAライブラリーからエクスプレッションクローニングを行った.その結果一つの新規遺伝子をクローニングし塩基配列を決定した.ホモロジー検索を行った結果,synGAPの一つのisoformであることがわかったので,仮にsyn GAP-b1と命名した.Northen blotによるとメッセンジャーは約6キロベースで,比較的発育の早い段階から発現しており,老化脳では発現が減少していた.in situ hybridizationを行い,ニューロンに局在することも明らかにした.
2. PSDタンパク質と反応性のあるもう一種の抗体を用いたエクスプレッションクローニングも行った.その結果,全長3.6キロベースのDNAがクローニングされた.ORFは約2.5キロベースのORFが同定された.Northern blottingおよびIn situ hybridizationでは,脳に広く発現がみられた.また,脳の他にtestisに強い発現が見られた.アミノ酸配列ではメンブレンと細胞骨格とのクロスリンクタンパク質であるtalinやその類縁タンパク質とカルボキシル末端側半分にホモロジーがみられた.フュージョンタンパク質を抗原として抗体を作成して,タンパク質の分布を調べたところ,脳とtestisに発現していた,また,脳のシナプス膜に多く分布していた.最近のデータベース検索でこの遺伝子のひとホモローグが報告されたので,それとの比較を含めたcharacterizationを行っている.また,ORFがさらに5'側に伸びているらしいことが判明したので,完全長を求めてクローニングを再開した.
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