アデノウイルスベクターを用いた各種動物での免疫機構解析法の開発

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09556066
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 甲斐 知恵子 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (10167330)
• 研究分担者: 宮沢 孝幸 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助手 (80282705) ; 山内 一也 日本生物科学研究所, 主任研究員 (30072888) ; 間 陽子 理化学研究所, 研究員 (50182994) ; 小船 富美夫 国立予防衛生研究所, 主任研究官 (80142644) ; 斉藤 泉 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)
• キーワード: 牛疫ウイルス / ウサギ / 細胞傷害試験 / 組み換えアデノウイルス / lacZ / 牛白血病ウイルス / ウシ / MHC

研究概要

牛疫のモデル動物であるウサギでの細胞障害試験法を確立するために、lacZ発現組み換えアデノウイルスを用いて、ウサギの抹消血細胞、精巣の線維芽細胞、精上皮細胞の初代培養細胞におけるウイルスの感受性、蛋白発現量、凍結保存等の条件を検討した。線維芽細胞および精上皮細胞では高い感受性とlacZの発現量を認めたが、抹消血細胞では認めなかった。凍結融解後の細胞の生存率、増殖率は線維芽細胞が最も高かった。よって、ウサギにおけるCTLassayの標的細胞として線維芽細胞が最も適当であると思われた。
牛疫ウイルス(RPV)のCTLの標的抗原と推察されるRPV-H蛋白において遺伝子の組み替えアデノウイルスの作製に成功した。また同様に候補蛋白と推察されるNP蛋白においては組換えワクチニアウイルスの構築が成功したので、これをウサギに免疫後、強毒RPVの攻撃試験を行なった。その結果,RPV-H組替えワクチニアウイルスの免疫の場合と比較して有意な防御効果を認めなかった。よってH蛋白遺伝子がCTLの標的抗原遺伝子として重要と考えられた。
ウシ主要組織適合性遺伝子複合体(MHC)(BoLA)クラスII遺伝子の中で最も多型に富み機能的な蛋白質をコードするBoLA-DRB3と、ウシ白血病ウイルス(BLV)による白血病発症との相関について解析した。その結果、Lys/Arg-β71、Gln/Asn-β78、Val-β78のアミノ酸配列を有するアリルが、BLVによる白血病に対して抵抗性である可能性が示唆された。
次に、以上の仮説をBLVの実験感染動物ヒツジを用いて検証した。BLVによる白血病に対して抵抗性と予測されたRK/Xの遺伝子型を有するヒツジは、BLVに対する高い中和抗体価と著しいウイルス増殖抑制が観察され、最終的に白血病を誘発しなかった。一方、X/Xの遺伝子型を保有する個体では、peptideで免疫後中和抗体の上昇は認められず、BLV攻撃接種後に急激なウイルス力価の上昇が観察され、2年後にリンパ肉腫に進行した。

研究成果

• [文献書誌] Aida,Y., et al.: "The role of tumor-associated antigen in bovine leukemia virus-induced lymphosarcoma." Leukemia. 11. 216-218 (1997)
• [文献書誌] Koguchi,A., et al.: "Tumor-associated antigen in lymph nodes during the progression of enzootic bovine leukosis." Leukemia. 11. 221-222 (1997)
• [文献書誌] Zhuang,W., et al.: "Point mutation of p53 tumor suppressor gene in bovine leukemia virus-induced lymphosarcoma." Leukemia. 11. 344-346 (1997)
• [文献書誌] Nakamura,K., et al.: "Immunizing effect of vaccinia virus expressing the nucleoprotein of rinderpest virus on systemic rinderpest virus infection in rabbits." Comp.Immunol.Microbiol.Infct.Dis.(in press).
• [文献書誌] Ohishi,K., et al.: "Immunogenicity of recombinant vaccinia virus(rVV)expressing rinderpest virus nucleocapsid protein in mice." J.Vet.Med.Sci.(in press).
• [文献書誌] Yamanouchi,K., et al: "New approaches to the development of virus vaccines for veterinary use." Rev.sci.tech.Off.int.Epiz.(in press).