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2000 年度 研究成果報告書概要

共焦点顕微鏡法とミクロインジェクションを組合せた組織細胞解析法の展開

研究課題

研究課題/領域番号 09557002
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分展開研究
研究分野 解剖学一般(含組織学・発生学)
研究機関群馬大学

研究代表者

高田 邦昭  群馬大学, 医学部, 教授 (20129290)

研究分担者 鈴木 雅一  群馬大学, 生体調節研究所, 助手 (60280913)
鈴木 健史  群馬大学, 生体調節研究所, 助手 (00261868)
研究期間 (年度) 1997 – 2000
キーワード共焦点顕微鏡法 / ミクロインジェクション / 核対比染色 / 蛍光抗体法 / アクアポリン / 糖輸送体 / 唾液腺 / 細胞膜
研究概要

共焦点レーザー顕微鏡システムを用いて蛍光像の観察をするときに核の局在部位は極めて重要な情報である.多重染色に適用可能なDNA特異的な色素について近年ゲル電気泳動のために開発された色素に着目してスクリーニングし,緑の蛍光色素としてはSYBR Green I,SYTOX Green,Pico Greenが,赤の蛍光色素としてはYO-PRO-3が,ファーレッドの蛍光色素としてはTO-PRO-3が優れていることを見出した.この核染色法は複雑な腺と導管の構造を有する唾液腺における水チャネルのアクアポリン5(AQP5)の分布局在を共焦点スライス像から再構成したり,培養上皮細胞での細胞膜輸送体やチャネル分子の極性を持った分布を観察するうえで,きわめて有効であった.ミクロインジェクション法は糖輸送体遺伝子の培養細胞の導入にリポフェクション法と併行して用いた.このようなトランジェントな発現系で糖輸送体GLUT4を培養細胞で発現させ,その局在を観察した.細胞は固定後,蛍光抗体染色や上記の核染色を用いた標本を共焦点顕微鏡等で観察した.またグリーンフルオレッセントプロテイン-GLUT4を用いて,生きている細胞での動態の観察もおこなった.ミクロインジェクション法をはじめとする方法で,少数の細胞で目的の遺伝子を発現させ,それについて共焦点顕微鏡法を用いて三次元的に詳細に解析する方法は,目的とする遺伝子産物の局在観察のためにきわめて有効であった.

  • 研究成果

    (12件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (12件)

  • [文献書誌] Suzuki T: "DNA staining for fluorescence and laser confocal microscopy."J Histochem Cytochem. 45. 49-53 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Matsuzaki T: "Nuclear staining for laser confocal microscopy."Acta Histochem Cytochem. 30. 309-314 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Takata K: "Transport of glucose across the blood-tissue barriers."Intl Rev Cytol. 172. 1-53 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Suzuki T: "Fluorescence counter-staining of cell nuclear DNA for multi-color laser confocal microscopy."Acta Histochem Cytochem. 31. 297-301 (1998)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Takata K: "Sugar transporters in polarized epithelial cells."Acta Histochem Cytochem. 32. 53-58 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Matsuzaki T: "Aquaporin-5(AQP5), a water channel protein, in the rat salivary and lacrimal gland : Immunolocalization and effect of secretory stimulation."Cell Tissue Res. 295. 513-521 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Suzuki T: "DNA staining for fluorescence and laser confocal microscopy."J Histochem Cytochem. 45. 49-53 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Matsuzaki T: "Nuclear staining for laser confocal microscopy."Acta Histochem Cytochem. 30. 309-314 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Takata K: "Transport of glucose across the blood-tissue barriers."Intl Rev Cytol. 172. 1-53 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Suzuki T: "Fluorescence counter-staining of cell nuclear DNA for multi-color laser confocal microscopy."Acta Histochem Cytochem. 31. 297-301 (1998)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Takata K: "Sugar transporters in polarized epithelial cells."Acta Histochem Cytochem. 32. 53-58 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Matsuzaki T: "Aquaporin-5 (AQP5), a water channel protein, in the rat salivary and lacrimal gland : Immunolocalization and effect of secretory stimulation."Cell Tissue Res. 295. 513-521 (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 2002-03-26  

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