1999 年度実績報告書

抗皮膚基底膜部抗体を示す各種自己免疫性水疱症の新しい分子生物学的診断法の確立

研究課題

研究課題/領域番号	09557065
研究機関	久留米大学
研究代表者	橋本隆久留米大学, 医学部, 教授 (20129597)
研究分担者	宮里稔久留米大学, 医学部, 講師 (50182001) 森理久留米大学, 医学部, 助教授 (10175630)
キーワード	自己免疫性水疱症 / 角化細胞 / リコンビナント蛋白 / 水疱性類天疱瘡 / ヘミデスモソーム / 表皮基底膜部 / PCR / 免疫ブロット法
研究概要	まず、培養ケラチノサイトのmRNAより作製したcDNAライブラリーをテンプレートとしたPCRを用い、BP230の全長cDNAをカバーする3倍位のcDNAを得、大腸菌発現ベクターpGEXに組み込み、リコンビナント蛋白を作成した。その各種リコンビナント蛋白を用いた免疫ブロット法で、水疱性類天疱瘡血清中の抗表皮基底膜部抗体がBP230上の多数のエピトープに特異的に反応することを見いだした。次いで、同様にBP180の細胞外部位の全長cDNAをカバーする3部位のcDNAを得、リコンビナント蛋白を作成した。その各種リコビナント蛋白を用いた免疫ブロット法で、水疱性類天疱瘡血清がN末端部に反応するのに対して、瘢痕性類天疱瘡はC末端部に反応することを見いだした。また、lamina lucida型線状IgA水疱性皮膚症血清がBP180の細胞外部位のN末端に近いC15部位に反応することを見いだした。次にVII型コラーゲンのNC1およびNC2部位のリコンビナント蛋白を用いた免疫ブロット法で、後天性表皮水疱症とbullous SLEが主にNC1部位に反応すること、一部はNC2部位にも反応すること、sublamina densa型線状IgA水疱性皮膚症血清はこれらの部位に反応しないことを見いだし、疾患によりエピトープの部位が異なる可能性を示した。さらに、新しい200kD基底膜抗原の性状を明らかにするため、ケラチノサイトcDNAライブラリーを免疫スクリーニングし、この蛋白がVII型コラーゲンないしラミニン1である可能性を示した。現在、これらのリコンビナント蛋白を用いて、より簡便でまた多数の試料を検索できるELISA法を検討中である。これらのリコンビナント蛋白を用いた免疫ブロット法ないしELISA法は今後、抗基底膜部自己抗体を示す各種自己免疫性水疱症の診断に非常に有用なものとなると考えられる。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Murakami H et al.: "Analysis of antigens targeted by circulating IgG and IgA antibodies in 50 patients with cicatricial pemphigoid"J Dermatol Sci. 17. 39-44 (1998)
[文献書誌] Hirako Y et al.: "Cleavage of BP180 (Type XVII collagen) vields a 120 kDa collagenous extracellular peptide"J Biol Chem. 273(16). 9711-9717 (1998)
[文献書誌] Chan LS et al.: "Epitope spreading: lessons from autoimmune skin diseases"J Invest Dermatol. 110. 103-109 (1998)
[文献書誌] Nousari HC et al.: "The mechanism of respiratory failure in paraneo;lastic pemphigus"N Eng J Med. 340. 1406-1410 (1999)
[文献書誌] Nie Z,Hashimoto T: "Complementary peptide against the major epitope in NCa6A of BP180 show no spidicificity as vaccines of bulous pemphigoid"J Dermatol Sci. 21. 157-164 (1999)
[文献書誌] Hashimoto T: "Skin diseases related to abnormality in desmosomes and hemidesmosomes"Dermatol Sci. 20. 81-84 (1999)
[文献書誌] 橋本隆: "KEY WORD皮膚疾患"先端医学. 210 (1999)
[文献書誌] 橋本隆: "皮膚科診療プラクティス"文光堂. 305 (1999)

1999 年度 実績報告書

抗皮膚基底膜部抗体を示す各種自己免疫性水疱症の新しい分子生物学的診断法の確立

研究代表者

橋本 隆 久留米大学, 医学部, 教授 (20129597)

研究成果

[文献書誌] Murakami H et al.: "Analysis of antigens targeted by circulating IgG and IgA antibodies in 50 patients with cicatricial pemphigoid"J Dermatol Sci. 17. 39-44 (1998)

[文献書誌] Hirako Y et al.: "Cleavage of BP180 (Type XVII collagen) vields a 120 kDa collagenous extracellular peptide"J Biol Chem. 273(16). 9711-9717 (1998)

[文献書誌] Chan LS et al.: "Epitope spreading: lessons from autoimmune skin diseases"J Invest Dermatol. 110. 103-109 (1998)

[文献書誌] Nousari HC et al.: "The mechanism of respiratory failure in paraneo;lastic pemphigus"N Eng J Med. 340. 1406-1410 (1999)

[文献書誌] Nie Z,Hashimoto T: "Complementary peptide against the major epitope in NCa6A of BP180 show no spidicificity as vaccines of bulous pemphigoid"J Dermatol Sci. 21. 157-164 (1999)

[文献書誌] Hashimoto T: "Skin diseases related to abnormality in desmosomes and hemidesmosomes"Dermatol Sci. 20. 81-84 (1999)

[文献書誌] 橋本 隆: "KEY WORD皮膚疾患"先端医学. 210 (1999)

[文献書誌] 橋本 隆: "皮膚科診療プラクティス"文光堂. 305 (1999)

1999 年度実績報告書

橋本隆久留米大学, 医学部, 教授 (20129597)

[文献書誌] 橋本隆: "KEY WORD皮膚疾患"先端医学. 210 (1999)

[文献書誌] 橋本隆: "皮膚科診療プラクティス"文光堂. 305 (1999)