| 研究課題/領域番号 |
09557118
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
斎藤 洋一 大阪大学, 医学部, 助手 (20252661)
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| 研究分担者 |
綿引 正則 ニッポンジーン (株), 研究開発部, 部長
恵口 豊 大阪大学, 医学部, 助教授 (20243206)
有田 憲生 大阪大学, 医学部, 講師 (80159508)
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| キーワード | Pain / β-endorphin / polymer capsule / ex vivo gene therapy / xenograft / Tet-On system / tetracycline / doxycycline |
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| 研究概要 |
我々の研究では新しい鎮痛治療法として、β-endorphin(最も強力なオピエート)の前駆体遺伝子(POMC)を、テトラサイクリン作動性のジーンスイッチ、Tet-On systemの下流に遺伝子組み換えをおこない、それをマウス神経芽細胞腫株(Neuro2A)に遺伝子導入し、ポリマーカプセルに封入して髄腔内に移植した。細胞は腹腔内に投与したテトラサイクリン誘導体の量に応じて、ペプチドを分泌することを確認した。しかしながら、Tet-On systemとβ-endorphinの前駆体遺伝子との相性が悪いためか、この細胞株はβ-endorphinを分泌しなかった。遺伝子導入を繰り返しても、β-endorphinを分泌する細胞株を樹立できなかった。そこで、ヒト型β-endorphinを分泌させるために、signal codonの下流のPC1酵素認識部位にヒト型β-endorphinの遺伝子配列を組み替えして、short POMC遺伝子を作成した。それをNeuro2Aに遺伝子導入したが、O-endorphin分泌は得られなかった。この結果はshort POMC遺伝子が短すぎるのと、ribosome膜上でのペプチドの露出サイドの問題と考えられた。
そこで現在は、前駆体遺伝子POMCのsignal codonの下流にヒト型O-endorphin遺伝子配列、その下流にmetallopeptidaseの認識配列、またその下流にtransmembrane domain遺伝子を組み換え、繊維芽細胞に遺伝子導入している。予備実験の結果としてはヒト型β-endorphin分泌を確認している。
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