| 研究概要 |
我々は,歯周靭帯由来線維芽細胞(periodontal ligament-derived fibroblast:PLF)の無血清培養系を確立し,PLFの増殖・分化にfibroblast growth factor(FGF)-FGF受容体(FGFR)-1系が重要な働きをしていることをすでに報告した。本研究では,歯周靭帯由来上皮細胞(マラッセ上皮遺残由来細胞:ME)の無血清培養系を確立し,MEの増殖におけるFGF-1,-2,-7/keratinocyte growth factor(KGF)の影響ならびに同細胞におけるFGFRの発現を蛋白質および遺伝子レベルで検討した。さらに,MEとPLFの細胞間相互作用ならびにMEと口腔粘膜由来上皮細胞(OE)および唾液腺由来上皮細胞(SGE)との細胞内分泌学的相違について無血清培養系を用いて検討した。
[方法]MEはヒト健全小臼歯歯根中央より分離し,基礎培地としてRPMI1640とDMEMの混合(1:1)培地(RD)で培養した後,MCDBl53HAA培地に種々の因子を加えて継代培養を行った。接着因子としてはI型collagenを用いた。FGF-1,-2,-7/KGFの細胞増殖に及ぼす影響を検討し,さらに,PLFにおけるFGF-7/KGFの発現を免疫組織学的に検討した。また,reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR),PCR-Southem hybridizationおよびribonuclease protection assay(RPA)を用いて各細胞でのFGFR遺伝子群の発現を検討した。
[結果および考察]FGF-1およびFGF-7/KGFはMEとSGEの増殖を濃度依存的に促進したが,FGF-2は促進作用を示さなかった。一方,FGF-1,-2,-7/KGFのいずれもOEの増殖を促進した。RT-PCRおよびPCR-Southem hybridizationの結果,MEおよびSMEはKGF受容体であるFGFR2-(IIIb)mRNAのみを発現していたが,OEはFGFR1-(IIIC),FGFR2-(IIIb),FGFR3-(IIIb),FGFR4 mRNAを発現していた。さらに,免疫組織染色,RT-PCR,PCR-Southem hybridizationおよびRPAの結果,PLFはFGF-7/KGF蛋白並びにmRNAを発現していた。また,その発現はPLFの分化に伴い低下した。
以上の結果から,ヒト歯周靭帯由来上皮細胞の無血清培養系を確立すると共に,歯周靭帯の主な構成成分であるヒト歯周靭帯由来上皮細胞および歯周靭帯由来線維芽細胞はFGF-7/KGF-FGF-7/KGF受容体系を介した上皮一間葉相互作用によりバラクライン的に制御されている可能性が示され,歯周靭帯再生機構および歯周靭帯付インプラントの開発に有用な知見を集積することができた。
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