| 研究課題/領域番号 |
09557219
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| 研究機関 | 昭和大学 |
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研究代表者 |
前田 昌子 昭和大学, 薬学部, 教授 (00053869)
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| 研究分担者 |
田島 規子 昭和大学, 薬学部, 助手 (30297022)
金光 まひな 昭和大学, 薬学部, 助手 (30286869)
小門 〓 昭和大学, 薬学部, 助手 (20266159)
伊藤 克敏 昭和大学, 薬学部, 講師 (20223141)
荒川 秀俊 昭和大学, 薬学部, 助教授 (70129807)
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| キーワード | 生物発光検出 / イムノアッセイ / ブロッティングアッセイ / 生体成分 / 遺伝子の分析 / イメージング / 制限酵素断片長多型 / BLEIA |
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| 研究概要 |
既に確立したATP産生酵素であるアセテートキナーゼ(AK)の発光検出法は、不安定なホタルルシフェラーゼの欠点を補う高感度な方法で、AKとして6x10^<-20>モルまで検出可能であった。AKを標識酵素として前年度までに甲状腺刺激ホルモン(TSH)、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)、17-ヒドロキシプロゲステロン(17-OHP)などのイムノアッセイを確立した。
また、ユニバーサルな検出系として、ビオチン化AK/ルシフェラーゼからなる検出試薬キット(ゼプトライトABC)を用い、マウスインターロイキン-6(mIL-6)の測定法を確立し、ストレス負荷時の各組織中のmIL-6の動態を測定した。
ブロッティングアッセイの検出への応用としては、α-フェトプロテインのウエスタンブロッティングに応用した。生物発光検出RFLP-ELISA法への応用は、骨粗鬆症のビタミンDレセプター遺伝子をモデルに検討した。即ち、ビオチン及びフルオレセイン標識プライマーを用いPCRを行い、次に制限酵素により消化後、抗フルオレセイン抗体固相化プレートを用いてイムノアッセイを行う。プレート上にトラップされたビオチンをビオチン化AKで生物発光検出した。その結果、電気泳動法と同様な正確さでビタミンDレセプター遺伝子の多型を検出出来た。本法は簡便で、一度に多量の試料を解析でき、骨粗鬆症の遺伝子診断法として有用な方法と思われる。
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