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1999 年度 実績報告書

硫酸化グリコサミノグリカン糖鎖の普遍的シークエンシング法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 09558082
研究機関神戸薬科大学

研究代表者

菅原 一幸  神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (60154449)

研究分担者 吉田 圭一  生化学工業株式会社, 糖鎖プロジェクト, チームリーダ
山田 修平  神戸薬科大学, 薬学部, 助手 (70240017)
北川 裕之  神戸薬科大学, 薬学部, 講師 (40221915)
キーワードグリコサミノグリカン / 硫酸化 / ヘパリナーゼ / コンドロイチナーゼ / 線虫 / デルマタン硫酸 / コンドロイチン硫酸 / ヘパリン
研究概要

動物組織のみに見い出され、高等な細胞での様々な機能が証明されてきている硫酸化グリコサミノグリカン糖鎖について、以下のような研究成果をえた。
(1)ヌタウナギ脊索の多硫酸化コンドロイチン硫酸H(多硫酸化デルマタン硫酸E)から新規の8種類の四糖と5種類の六糖を単離し、構造決定した。また、これらのオリゴ糖鎖のプロトンNMRスペクトルのデータを得た。
(2)構造解析に必須のToolとしてのバクテリア(Prevotella heparinolytica)由来のへパリン/ヘパラン硫酸の分解酵素であるへパリナーゼおよび同じくバクテリア(Flavobacterium)由来のコンドロイチン硫酸/デルマタン硫酸に作用するchondroitinase Cの基質特異性をそれぞれ明らかにした。
(3)蛍光試薬である2-aminobenzamideで糖鎖の還元末端を標識することによって、硫酸化グリコサミノグリカンの微量組成分析法を開発するとともに、この標識法とコンドロイチナーゼやハパリチナーゼなどの糖鎖分解酵素による消化を組み合わせることによって、高感度な糖鎖シークエンシング法を開発した。
(4)上記の新しく開発した微量分析法を用いて、線虫C.elegansに硫酸化されていないコンドロイチンと高度に硫酸化されたヘパラン硫酸が存在することを世界に先駆けて明らかにした。非常に下等な動物種にもこれらのグリコサミノグリカンが存在することから、それらの糖鎖の重要性が示唆された。

  • 研究成果

    (4件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (4件)

  • [文献書誌] 木下 亜希子: "Microanalysis of Glycosaminoglycan-Derived Oligosaccharides Labeled with a Fluorophore 2-Aminobenzamide by High-Performance Liquid Chromatography : Application to Disaccharide Composition Analysis and Exosequencing of Oligosaccharides"Anal.Biochem.. 269(2). 367-378 (1999)

  • [文献書誌] 津田 博美: "Substrate Specificity Studies of Flavobacterium Chondroitinase C and Heparitinases towards the Glycosaminoglycan-Protein Linkage Region : Use of a Sensitive Analytical Method Developed by Chromophore-Labeling of Linkage Glycoserines using Dimethylaminoazobenzenesulfonyl Chloride"Eur.J.Biochem.. 262(1). 127-133 (1999)

  • [文献書誌] 山田 修平: "Demonstration of Glycosaminoglycans in Caenorhabditis elegans"FEBS Lett.. 459(3). 327-331 (1999)

  • [文献書誌] 植岡 千香子: "Structural Determination of Novel Tetra- and Hexasaccharide Sequences Isolated from Chondroitin Sulfate H (Oversulfated Dermatan Sulfate) of Hagfish Notochord"Glycoconjugate J.. 16(6). 291-305 (1999)

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公開日: 2001-10-23   更新日: 2016-04-21  

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