| 研究概要 |
本研究では肝臓での薬物代謝反応(第1相及び2相反応)を試験管内で再構成することを目的とし、薬物代謝酸化酵素系(NADPH-P450還元酵素(CPR)及びチトクロームP450(CYP)と薬物抱合酵素(UDP-グルクロン酸転移酵素(UGT))を含む発現系の構築を行った。(1)動物細胞(COS細胞)を用いたラットUGT分子種の発現系の確立:肝臓ミクロソームで発現しているUGT1(A1,2,3,5,6,7)及びUGT2(B3,6,12)の計9種の分子種の発現系を構築することができた。(2)酵母を用いたCYP, CRP及びUGT発現系の確立:薬物の代謝過程における連続的な変換反応(酸化反応、抱合反応)を解析するために、酵母CPR,ラットCYP1A1及びUGT1A6を自立複製型あるいは染色体型ベクターに挿入し、それぞれを酵母に導入して7-エトキシクマリン(7EC)の酸化的脱エチル化に次ぐ抱合反応の解析を行った。単独発現系及び同時発現系においてCYP1A1とUGT1A6の発現系を構築することに成功した。酸化酵素系(CPR/CYP1A1)をプラスッミミッドベクターに発現させ、UGT1A6を染色体に組み込むことにより酸化酵素系と抱合酵素系を同時発現することのできるシステムを開発した。(3)薬物の代謝に関連する電子伝達系フラビン酵素(P450還元酵素、チトクロームb5還元酵素、一酸化窒素合成酵素フラビンドメインの大量発現系を確立し、キノン骨格をもつ薬物の還元機構を明らかにした。これらの研究により、薬物の酸化に伴う抱合及び還元に伴う抱合過程を解析する酵素システムを確立した。
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