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本年度は引き続きアラビドプシスにおけるブラシノステロイド生合成機能の追究のための代謝実験系の開発を試みるとともに、新規に見い出したブラシノステロイド欠損ミュータントの遺伝子の単離を試みた。代謝実験についてはブラシノステロイドの活性化に必要であるといわれているカスタステロンよりブラシノライドヘの変換の有無を調べた。アラビドプシス植物体茎葉部へ標識カスタステロンを注入し、一定時間経過後植物体を抽出してブラシノライドの同定を試みたが、検出することはできなかった。アラビドプシスでのカスタステロンからブラシノライドヘの変換活性は通常条件では著しく低いことが明らかとなった。このことは、カスタステロン自体が活性を持つか、あるいは特定の組織またはステージでブラシノライドへの変換活性が高まることを示唆している。
昨年度までに級で本研究で解析を行っているミュータントが生合成の後期のステップが阻害された新規のものであることが強く示唆されている。そこで本年度はミュータントの遺伝子をまず単離することを試みた。遺伝子が単離されれば、その発現や機能を調べることにより、アラビドプシスにおけるブラシノステロイド類の生合成機能を詳細に解析することができる。解析の結果、本ミュータントでは複数のT-DNAが挿入された変異体であることが明らかとなったので、交配により単一の遺伝子座に挿入変異のおきたミュータント形質を発現しているラインを作成した。引き続いてPCRによりT-DNAの隣接領域のゲノムDNAのクローニングを試みたが、本変異体ではT-DNAがタンデムに挿入されているため成功しなかった。現在ゲノムライブラリ一をミュータントより作成し、スクリーニングによる遺伝子の単離を試みている。
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