| 研究概要 |
カテプシンEは細胞内膜系プロテアーゼで、活性中心の構造からアスパラギン酸プロテアーゼに分類される。申請者はサルなどの哺乳類でcDNAクローニングを始めとする構造解析とその比較、さらに酵素活性の詳細な解析を行い多くの成果を挙げてきた。本研究では今までの成果から予想される幾つかの生理機能について、培養細胞とターゲティングマウスを用いた遺伝子工学の手法により細胞・個体レベルで明らかにすることを目的とした。
本研究の実績の概要は以下の通りである。
1. マウスカテプシンE遺伝子を単離した。Stratagene社のλFix遺伝子ライブラリーから全9個のエクソンをすべて含むカテプシンE遺伝子が得られた。エクソンの塩基配列を決定し、他のカテプシンEと比較し構造上の特徴を明らかにした。また遺伝子数を調べるため、組織抽出液の電気泳動後の活性染色、サザーン分析、FISH法による解析を行った。いずれも1遺伝子であることを支持する結果を得た。これらのことからカテプシンE遺伝子ターゲティングのための基礎的データの解析が終了した。この成果はBiomed.Res.に発表した.
2. 細胞内でのカテプシンEの機能を明らかにするため、回虫インヒビターの遺伝子導入を検討した。この基礎的研究として平成9年度には、インヒビターのcDNAクローニングと酵母での発現,生産されたタンパク質について機能部位の検索を進め、Lys110とLys75が活性発現に必須のアミノ酸であることを明らかにした。
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