| 研究概要 |
本研究では、難純化一本鎖RNAウイルス感染植物体から抽出されるウイルス由来の複製型二本鎖RNAから遺伝子のクローニングを行い、病原ウイルスの遺伝子に対応するcDNAを得ることを第一の目的とした。研究材料としてイチゴマイルドイエローエッジウイルス(SMYEV)、カンキツトリステザウイルス(CTV)、キュウリ黄化ウイルス(CYV)を取り上げ、クローニングと塩基配列の決定を行った。いずれのウイルスでも、感染葉からCF-11セルロースカラムを用いてウイルス由来と考えられる二本鎖RNAが得られ、cDNA合成とクローニングを行い、得られたクローンについては塩基配列を順次決定した。その結果、イチゴでは、PCR法でウイルスの検出を可能とした。さらに、大腸菌で融合タンパク質としてSMYEVの外被タンパク質を発現させ、ウイルスを検出するための抗血清を作製した。さらにこの抗血清を用いて,ウエスタンブロット法でSMYEVを簡便に検出できることを明らかにした。CTVでは少量のサンプルから抽出した複製型二本鎖RNAから強毒株と弱毒株の全塩基配列を決定した。CTVの全塩基配列決定は本研究が世界で4番目の快挙である。CYVでも,得られた二本鎖RNAからcDNAクローンが得られ、その塩基配列を決定し、PCR法で検出を可能とした。さらに、得られた塩基配列から、CYVが外国ですでに記載のあるbeet pseudo-yellows virusと同じであることを明らかにした。
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