赤血球前駆細胞分化異常モデルとしての犬遺伝性高Kおよび低アミノ酸輸送赤血球

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09660331
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 麻布大学
• 研究代表者: 藤瀬 浩 麻布大学, 獣医学部, 教授 (40106232)
• 研究分担者: 落合 秀治 麻布大学, 生物科学総合研究所, 助手 (20247307) ; 池田 輝雄 麻布大学, 獣医学部, 講師 (60151297) ; 代田 欣二 麻布大学, 生物科学総合研究所, 助教授 (70147974)
• キーワード: 犬 / 赤血球 / 赤芽球 / カリウム / アミノ酸 / K-CI共輸送 / 水チャネル / 遺伝子

研究概要

赤血球前駆細胞調製:犬遺伝性高Kおよび低アミノ酸輸送赤血球保有犬末梢血の単核球画分をパーコールを用いて分取し、第1段階培養としてPHA添加白血球培養上清を加えた培地で血球前駆細胞を誘導し、第2段階培養でエリスロポエチン添加培地で赤芽球を分化誘導した。第2段階でバーストしてくる細胞は全て赤芽球系であり、この方法で犬の赤芽球が純化され、その細胞は脱核し、赤血球の分化が確認された。
イオン輸送体ほかの遺伝子解析:上記犬赤芽球あるいは犬腎より、K-CI共輸送体、水チャネルAQP-CHIP遺伝子cDNA全長をRT-PCR、RACE法ほかを用いて、クローニングし、グルタミン酸/アスパラギン酸輸送体のうちGLASTの部分cDNAをRT-PCRを用いて赤芽球より検出した。犬赤芽球K-CI共輸送体のアミノ酸配列は報告されている他の動物臓器由来のものと96%前後の相同性であり、水チャネルAQP-CHIPのアミノ酸配列は他の動物と90-95%の相同性があった。犬赤芽球GLASTの部分cDNAはヒト、ラットの脳由来のものと85-92%の相同性があった。したがって、いずれも目的の遺伝子がクローニングされたと判断した。Subtraction法による系統間の差は現在までのところ見い出されていない。引き続き出発材料などを代えて検討を続ける予定である。
卵母細胞での発現:アフリカツメガエル卵母細胞を用いたイオン輸送測定のため、KアナログでるRbの放射性同位体^<86>Rbを用いる方法を確立した。クローニングしたK-CI共輸送体遺伝子をマイクロマニュピュレータで注入し、^<86>Rb取り込みを測定の予備実験が終了した。

研究成果

• [文献書誌] Fujise,H.,Abe,K.et al.: "K-CI cotransport and volume regulation in the light and the dense fraction of high-K dog red blood cells." American journal of Physiology. 273. R991-R998 (1997)
• [文献書誌] Fujise,H.,Higa,K.et al.: "Incidence of dogs possessing red bloodd cells with high K in Japan and East Asia." Journal of Veterinary Medical Science. 59. 495-497 (1997)
• [文献書誌] Fujise,H.et al.: "Heredity of red blood cells with high K and low glutathione(HK/HG)and high K and high glutathione(HK/LH)in a family of Japanese shiba dogs." Experimental Animal. 46. 41-46 (1997)