下垂体前葉細胞の分泌機能に対するミオシンおよびミオシン軽鎖キナーゼの役割

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09670007
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 千田 隆夫 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (10187875)
• キーワード: インスリン顆粒 / 細胞内運動 / アクチン / mycalolide B / ミオシン軽鎖キナーゼ / protein kinase C

研究概要

アクト・ミオシン系による分泌顆粒の運動調節機構を検討するために、MIN6細胞(膵B細胞由来インスリン分泌細胞株)に対するアクチン重合阻害剤mycalolide Bの影響を調べた。
1.生きているMIN6細胞におけるインスリン顆粒の運動を、位相差顕微鏡を用いたバイオイメージングによって計測した。mycalolide Bによってインスリン顆粒の細胞内運動は亢進した。
2.MIN6細胞におけるインスリン顆粒の分布は細胞によって、cytoplasmic type、intermediate type、peripheral typeの3つのパターンがあった。mycalolide Bによってperipheral typeの顆粒分布パターンを示す細胞が増加した(顆粒のmargination)。mycalolide Bによるインスリン顆粒のmarginationは、protein kinase Cのactivatorである12-0-tetradecanoyl-phorbol13-acetate(TPA)の長時間暴露に影響を受けなかった。
3.mycalolide Bによってインスリンの分泌量は一過性に増加した。種々の分泌刺激条件下でのインスリン分泌もmycalolide Bによって増加した。
4.mycalolide Bはミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)の分布には影響を与えなかった。
以上の結果から、アクチンフィラメントがインスリン顆粒の細胞内局在部位に大きな影響を与えることと、アクチンフィラメントの破壊が、インスリン分泌におけるprotein kinase Cの作用に促進的に働くことが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Yu W,Niwa T,Fukasawa T,Hidaka H,Senda T,Sasaki Y,Niki I: "Synergism of protein kinase A, protein kinase C, and myosin light-chain kinase in the secretory cascade of the pancreatic β-cell"Diabetes. 49. 945-952 (2000)
• [文献書誌] Satoh K,Morishita T,Haraguchi K,Kakinuma N,Akivama T,Senda T: "Expression and localization of the LGN protein in the mouse brain with reference to its relationship with Gαi2"Med Electron Microsc. 32. 221-225 (2000)
• [文献書誌] Kawasaki Y,Senda T 他6名: "Asef, a link between the tumor suppressor APC and G-protein signaling"Science. 289. 1194-1197 (2000)
• [文献書誌] Fan Q-W,Yu W,Senda T,Yanagisawa K,Michikawa M: "Cholesterol-dependent modulation of tau phosphorylation in cultured neurons"J Neurochem. 76. 391-400 (2001)
• [文献書誌] Niwa T,Fukasawa T,Yu W,Nimura Y,Senda T,Ohgawara H,Niki I: "Characterization of secretory and morphological properties of primary cultured endocrine cells from porcine pancreata"Pancreas. (印刷中).
• [文献書誌] Kohu K,Roy BC,Kuroda T,Kakinuma N,Akiyama T,Senda T: "Localization of the novel GAP family protein SPAL in epithelial cells"Acta Histochem Cytochem. (印刷中).