|
1. 成人ヒト骨格筋におけるダリア細胞株由来神経栄養因子(GDNF)の発現を詳細に検討した。GDNFに対するポリクローナル抗体を用いた免疫組織化学染色で、GDNF様免疫反応性が、すべての筋線維の細胞膜直下、細胞膜、内鞘および筋内有髄神経軸索にみられた。特に神経筋接合部に著明な集積がみられた。RT-PCR解析を行ったところ、骨格筋からGDNF分子が増幅されたが、運動ニューロンを含む脊髄前角細胞からは増幅されなかった。
神経筋接合部において、GDNF受容体分子の一つであるGFRα-1様免疫反応性が集積していることがわかった。
以上の結果から、筋由来のGDNFが神経筋接合部にある運動ニューロン終末から受容体分子を介して取り込まれ、軸索内を逆行性に輸送されることが示唆された。
2. ヒト神経筋疾患におけるGDNFの発現変化を検討した。その結果、多発性筋炎、Duchenne型筋ジストロフィー症などの疾患筋において、再生線維に免疫反応性の亢進が見られた。RT-PCR解析を行ったところ、これらの筋では正常筋で発現していた短い型のGDNF mRNAに加え、完全長型のGDNF mRNAが発現していることがわかった。
以上の結果から、GDNFが筋再生あるいは筋再生に伴う神経筋接合部の再構築に関与している可能性が示唆された。
3. ニワトリ胚肢芽cDNAからGDNFファミリーのクローニングを試みた。得られた分子はヒトあるいはげっ歯類GDNFと約90%の相同性を持ち、ニワトリのGDNFであると考えられた。RT-PCR解析によって、GDNFは4日目胚で発現し、6日目で発現が減少することがわかった。
|
