第2のFAK分子族チロシンキナーゼCAKβを活性化する上流シグナル伝達路の同定

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09670137
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 佐々木 輝捷 札幌医科大学, 医学部・附属がん研究所, 教授 (00045494)
• 研究分担者: 佐々木 洋子 札幌医科大学, 医学部・附属がん研究所, 講師 (60045424)
• キーワード: タンパク質チロシンキナーゼ / CAKβ / FAK / パキシリン / Hic-5 / 焦点接着 / チロシンリン酸化

研究概要

私達は、FAK分子族に属する第2のタンパク質チロシンキナーゼをクローン化し、これを細胞接着キナーゼβ(CAKβ)と命名した。CAKβに共役するシグナル伝達路を明らかにするために、CAKβC-ドメインをプローベに用いてヒト脳cNDAライブラリーをスクリーニングし、CAKβ結合タンパク質(CBP-1)のcDNAをクローン化した。CBP-1は、Hic-5のヒトホモログである事が明らかになったが、私達のcDNAにより、Hic-5のN末側には、少なくともさらに16アミノ酸残基多く存在することが明らかになった。Hic-5は焦点接着に局在した。Hic-5のアミノ酸配列は、4個のLIMドメインとLDモチーフにおいて焦点接着局在タンパク質であるパキシリンに最も近縁であった。Hic-5とパキシリンは、そのNドメインがCAKβおよびFAKのCドメイン後半部分に特異的に結合した。抗Hic-5抗体を用いて、WFB細胞抽出液からHic-5を免疫沈降すると、CAKβが共沈した。WFB細胞におけるCAKβのチロシンリン酸化は、血清、リゾホスファチジン酸(LPA)、エンドセリンなどによる刺激、および高浸透圧刺激で亢進するが、これらCAKβを活性化する刺激でHic-5のチロシンリン酸化も亢進した。Hic-5とCAKβとの結合は、Hic-5のチロシンリン酸化に重要であることを示唆する結果が得られた。Hic-5とパキシリンとは共に焦点接着に局在するが、その機能は異なっている可能性が強く、今後の研究により、Hic-5の機能を明らかにする必要がある。

研究成果

• [文献書誌] Matsuya,Manabu: "Cell adhesion kinaseβ forms a complex with a new member,Hic-5,of proteins localized at focal adhesions." J.Biol.Chem.273・2. 1003-1014 (1998)
• [文献書誌] Mitaka,Toshihiro: "Restricted expression of cell adhesion kinase-β in rat tissues." Amer.J.Pathol.150・1. 267-281 (1997)
• [文献書誌] Sicliano,Julio.C.: "Differential regulation of PYK2/CAKβ and pp125-FAK by glutamate and depolarization in rat hippocampus." J.Biol.Chem.271・46. 28942-28946 (1996)
• [文献書誌] Ishino,Masaho: "Identification of an Efs isoform that lacks the SH3 domain and chromosomal mapping of human Efs." Oncogene. 15・14. 1741-1745 (1997)
• [文献書誌] Ohba,Takeai: "Interaction of two proline-rich sequences of cell adhesion kinase β with SH3 domains of p130^<Cas>-relatedproteins and a GTPase-activating protein,Graf." Biochemical J.330・3. 1243-1254 (1998)