ロイコトリエン受容体のクローニングと細胞内情報伝達機構

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09670147
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 和泉 孝志 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (70232361)
• 研究分担者: 粂 和彦 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (30251218) ; 清水 孝雄 東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80127092)
• キーワード: ロイコトリエンB_4 / ロイコトリエン受容体 / 細胞内情報伝達

研究概要

プロスタグランジン(PG)、ロイコトリエン(LT)、血小板活性化因子(PAF)などの生理活性脂質は炎症、免疫、アレルギー反応の重要なメディエーターと考えられており、細胞膜に存在する特異的な受容体を介してその作用を発現する。我々は、昨年度の本研究により、HL-60細胞におけるLTB_4受容体の誘導現象を用いたDiffer ential Display法によるクローニングに成功した。今年度の本研究の目的は、LTB_4受容体のシグナルおよび発現制御の解析を行うこと、さらにLTD_4受容体の発現クローニングを試みまた、細胞内情報伝達の解明を行うことであった。現在までの成果は以下のように要約される。
1 LTB_4受容体の発現調節とノックアウトマウスの作成
ヒトゲノムDNAの解析を行いLTB_4受容体の転写調節の機構を解明した。ノックアウトマウスの作成にむけてマウス遺伝子のクローニングとターゲッティングベクターの作成を行った。
2 LTD_4受容体のクローニング
哺乳動物培養細胞に一過性に受容体を発現させ、リガンド刺激によるルシフェラーゼの活性化や細胞内カルシウム上昇反応を指標とした発現クローニングの系を確立した。ヒト肺より作製したcDNAライブラリーを用いて、現在スクリーニングを行っているところである。
3 THP-1細胞におけるLTD_4受容体を介する細胞内情報伝達機構の解明
ヒト白血球系の細胞であるTHP-1細胞においてLTD_4は顕著なMAP活性化をもたらすことを明らかにした。さらに、その活性化経路を解明し、PKC、Raf-1の関与を報告した。

研究成果

• [文献書誌] Hoshino,M.,Izumi,T.,and Shimizu,T.: "Leukotriene D4 activates mitogen-activated protein kinase through a protein kinase Calpha-Raf-1-dependent pathway in human monocytic leukemia THP-1 cells." J.Biol.Chem.273. 4878-4882 (1998)
• [文献書誌] Ishii,I.,Saitoh,E.,Izumi,T.,et al.: "Agonist-induced sequestration,recycling and resensitization of platelet-activating factor receptor:role of cytoplasmic tail phosphorylation in each process." J.Biol.Chem.273. 9878-9885 (1998)
• [文献書誌] Igarashi,T.,Yokomizo,T.,Tsutsumi,O.,et al.: "Characterization of the leukotriene B4 receptor in porcine leukocytes. Separation and reconstitution with heterotrimeric GTP-binding proteins." Eur.J.Biochem.259. 419-425 (1999)
• [文献書誌] Fukasawa,M.K.,Fukasawa,K.,et al.: "Aminopeptidase B is structually related to leukotriene A4 hydrolase but not a bifunctional enzyme with epoxide hydrolase activity." Biochem.J.in press. (1999)
• [文献書誌] Yokomizo,T.,Masuda,K.,Kato,K.,et al.: "Leukotriene B4 Receptor;cloning and intracellular signaling." Am.J.Resp.Crit.Care Med.in press. (1999)
• [文献書誌] Izumi,T.,Yokomizo,T.,Igarashi,T.,Shimizu,T.: "Eicosanoids and Other Bioactive Lipids Cancer,Inflammation and Related Diseases,4" Molecular cloning and characterization of leukotriene B4 receptor. in press, (1999)