サイクリンD_1遺伝子5′側上流領域メチル化による遺伝子発現調節機構の解析

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09670226
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 北澤 荘平 神戸大学, 医学部, 講師 (90186239)
• キーワード: プロモータ / 遺伝子発現 / サイクリンD_1 / CpG Locus

研究概要

サイクリンD1遺伝子プロモータ領域を詳細に検討する目的で、Long-EvansラットサイクリンD1遺伝子5'側上流領域をクローニングした。得られたサイクリンD1遺伝子ブロモータ領域をもちいて、研究を遂行した。白血病細胞亜株の表現型のなかで、Steady-StateのサイクリンD1遺伝子発現量と相関していたものは、プラスチックシャーレに対する接着性であった。テフロンコートのシャーレにて浮遊状態で培養してもサイクリンD1遺伝子発現量には変化が見られなかった。私共は、サイクリンD1遺伝子発現袷亢進が、血球系細胞においては、細胞の接着性を制御しているという仮説の下に、細胞接着分子のなかで、特にインテグリンの発現状態の検討を行った。α4インテグリンサブユニットに対する抗体を用いた免疫沈降法にて、細胞亜株間で、サイクリンD1遺伝子発現量と相関して特異的にα4インテグリンサブユニットの発現上昇を認めた。In vivoにおける脱メチル化とα4インテグリンサブユニットとの相関に関しても検討を行い、病理組織検体をもちいたPCR法により、CpG Locusのメチル化にともない、サイクリンD1遺伝子発現、α4インテグリンサブユニットの発現状態が変化することを見いだした。この知見は、癌細胞の進展にともなう細胞接着性の変化、増殖速度の増加を説明する実験モデルであり、この成果を国内外の学会に報告した。また現在、学術雑誌に成果を発表すべく学術論文を作成している。

研究成果

• [文献書誌] Gohji K et al: "Serum matrix metalloproteinase-2 and its density in men with prostate cancer as a new predictor of disease extension" Int.Journal of Cancer. 79. 96-101 (1998)
• [文献書誌] Tamada H et al: "Molecular cloning and analysis of the 5′-Hanking region of the human bone morphogenetic protein-6(BMP-6)" Biochemica et Biophysica Acta. 1395. 241-251 (1998)
• [文献書誌] Kitazawa R et al: "Expression of bone morphogenetic proteins(BMPs)in fractured mouse bone tissue" Acta Histochemica et cytochemica. 31. 231-236 (1998)
• [文献書誌] Kitazawa S et al: "Promoter Structure of human sonic hedgehog gene" Biochemica et Biophysica Acta. 1443. 358-363 (1998)
• [文献書誌] Minami R.et al: "Analysis of 5′-Hanking region of human smad4(DPC4)gene" Biochemica et Biophysica Acta. 1443. 182-185 (1998)
• [文献書誌] Kitazawa S et al: "In situ hybridization with polymerase chain reaction-derived single-stranded DNA probe" Histochemistry and Cell Biology. 111. 7-12 (1999)
• [文献書誌] 北澤荘平 他: "In situ hybridization技法" 学際企画, 220 (1998)