研究課題/領域番号 |
09670258
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研究機関 | 鳥取大学 |
研究代表者 |
平井 和光 鳥取大学, 医学部, 教授 (20093940)
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研究分担者 |
王 浩然 鳥取大学, 医学部, 助手 (80314574)
福本 宗嗣 鳥取大学, 医学部, 助教授 (60111126)
佐藤 建三 鳥取大学, 医学部, 教授 (40113196)
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キーワード | 条虫 / マンソン裂頭条虫 / 生理活性物質 / 成長ホルモン / 腹腔マクロファージ / サイトカイン / TNF-α抑制因子 |
研究概要 |
1.マンソン裂頭条虫擬充尾虫が産生する成長ホルモン様因子(PGF)の融合蛋白の作成 PGFのcDNAをクローニングし、GST蛋白を発現するpGEX-5X-1 vectorに組込んで大腸菌XL-1blueにてGST融合蛋白の合成を試みたが、可溶化GST-融合蛋白を作成することはできなかった。次に全長のcDNAではなくfragme nt-cDNAをXL-1blueに挿入したところ溶解度の比較的高いGST融合蛋白を発現できたが活性を持たなかった。次いでG418 resistant vectorにligationして全長cDNAを3Y1 rat fibroblastに挿入ししたところ、PGFmRNAの高い発現が観察された。しかし、培養上清に活性は存在せず、分泌蛋白として産生されなかった。次に試みたのが昆虫細胞Sf9 pIZ/V5-His plasmid vector を用いてPGFmRNAをtransfectionしPGF蛋白の発現を試みている。 2.マンソン烈頭条虫擬充尾虫の培養上清のマクロファージ・サイトカイン産生に及ぼす影響 (1)マウス腹腔マクロファージと擬充尾虫を共存させて培養し、LPS刺激するとTNF-α遺伝子の発現が抑制された。 (2)マクロファージ培養液に擬充尾虫培養上清を添加するとLPS刺激3時間後からINF-α遺伝子の発現が抑制された。 (3)擬充尾虫感染マウスから採取されたマクロファージのLPS刺激により発現するTNF-α遺伝子は発現が対照マウスに比較して抑制された。 (4)培養上清を添加したマクロファージの培養液上清中のTNF-α濃度をELISAにて測定すると対照より低値であった。 (5)培養上清のマクロファージTNF-α遺伝子の抑制にはprostaglandinE2やIL-10は関与しないことが確認された。
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