|
1分子レベルでのMHC-ペプチド-TCR会合の特異性の解析
1. ポジショナルスキャニングによるMHC class I分子のペプチド選択性の解析と予想
1アミノ酸位を固定した合成ペプチドライブラリーを作製し、MHC class I分子のペプチド結合特異性を解析した(Data Base公開準備中)。これをもとに任意のペプチドのMHC結合能を測定し、予測値と比較した。その結果、位置ごとにアミノ酸を独立に扱うことの有効性と限界が示唆された。
2. ガン抗原、自己抗原、肝炎ウイルス由来のMHC結合ペプチドの同定
上記予想法を応用して、未熟白血病細胞や多くの固形ガンに高発現をみせるヒト、マウスのガン抗原WT1や自己抗原、肝炎ウイルス、マラリア原虫のMHC結合ペプチドを同定した。
3. 可溶化MHC classI分子、可溶化T細胞レセプター(TCR)の作製
TCR-MHC-ペプチド間の結晶構造解析、また1分子レベルでの結合能を測定するため、これらの分子の細胞外ドメインの、酵母、大腸菌による発現を試みた。
1細胞レベルでの自己-非自己のみわけの分子機構
ペプチドライブラリーを用いたポジショナルスキャニングにより、TCRに対し結合親和性の異なる一連の1アミノ酸置換ペプチドを作製し、T細胞による認識を比較した。ごく弱い結合親和性をもつMHC-ペプチドの認識においてはTCR周辺へのCD8分子の動員の効率が顕著に落ち、CD8の動員を伴わないTCRからの刺激はT細胞の活性化に負に働くことがわかった。
|
