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本研究課題では、本年度は主として1個の指紋からSTR多型の検出を可能にするため、以下のような検討を行った。
ガラス、紙、金属、プラスチック等に実験的に付着させた指紋からのSTR多型検出のために、以下に示す各方法について検討した。
1) Dual-PCR法:同一のプライマーセットにより連続した2回のPCRを行った。
2) Nested PCR法:Dual-PCR法と同様に2回のPCRを連続して行うが、2回目のPCRでは1回目のプライマーセットの内側の領域に設定した新たなプライマーセットによりPCRを行った。
3) PEP-PCR法:15-merのランダムプライマーを用いたPrimer Extention Preamplification(PEP)法により試料中のゲノムDNA全体を増幅した後、その産物を鋳型としてPCRを行った。
4) PEP法とDual-PCR法或いはNested PCR法との併用法:PEP法により試料中のDNAを増幅した後、その産物を鋳型としてを行った。
その結果、ガラス、紙、金属、プラスチック等に実験的に指紋を付着させた後、指紋付着物を滅菌蒸留水で湿らせた小綿球を用いて拭き取り、還元剤ジチオスレイトール存在下にDNAを抽出し、これを鋳型として、Dual-PCR法およびPEP法とDual-PCR法との併用法によりSTR多型の検出が可能であった。
なお、STR多型のアレル増幅産物は、7M尿素を含む4%ポリアクリルアミドゲル電気泳動後、銀染色により検出し、また、蛍光プライマーによる増幅産物はキャピラリー電気泳動装置によりアレルの解析を行った。
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