C型肝炎ウイルス蛋白と相互作用する宿主ヒト蛋白のクローニング

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09670518
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 吉田 晴彦 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60240305)
• 研究分担者: 加藤 直也 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (90313220) ; 白鳥 康史 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (70196624) ; 小俣 政男 東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (90125914)
• キーワード: C型肝炎ウイルス / NS5A / 転写 / TBP / TAF / Core / NF-kB / p53

研究概要

まず、C型肝炎ウイルス(HCV)NS5A転写活性化能と臨床病態との関連を検討した。HCVtype1b感染患者25例のNS5Aをcloningし、塩基配列を決定し、それらの転写活性化能につき検討した。患者から得られた転写活性化ドメインからなるcloneのすべてにおいて転写活性化能が認められた。すべての症例において、酸性アミノ酸領域およびプロリンに富む領域が認められ、酸性アミノ酸領域では電荷が非常に良く保存され、またプロリンに富む領域でもアミノ酸配列が良く保存されており、機能上重要であることを示唆した。転写活性化ドメインのアミノ酸置換は転写活性化能の強さに著しく影響したが、転写活性化能の強さと病態との関連は明らかではなかった。次に、NS5A蛋白とヒトの基本転写因子群との相互作用につき免疫沈降法にて検討し、NS5AがTFlDの構成成分であるTATA binding protein(TBP)およびTBP associated factor(TAF)の一部、TAF_<ll>70.TAF_<ll>32、TAF_<ll>28、TAF_<ll>20、TAF_<ll>18と結合することを認めた。また、7種のHCV蛋白、Core、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5Bをmammalian expression vectorにcloningし、HeLa細胞を用いてHCV蛋白が惹起する細胞内シグナル伝達pathwayにつき検討した。その結果、Core蛋白がNF-kB pathway、MAPKカスケード、JNKカスケードをNS4B蛋白がNF-kB pathwayを活性化することを見出した。また、HCV蛋白が癌抑制遺伝子p53機能に及ぼす影響の検討を行い、Core蛋白がp53と結合することにより、p53の機能を増強していることを明らかにした。

研究成果

• [文献書誌] Shiratori Y, Kato N, Yoshida H, et al.: "How soon can a vivological sustained response be determined after withdrawal of lFN therapy in chronic hepatitis C"J Gastroenterol Hepatol. 14. 79-84 (1999)
• [文献書誌] Ono E, Kato N, Yoshida H, et al.: "Platelet count reflects stage of chronicl hepatitis C"Hepatol Res.. 15. 192-200 (1999)
• [文献書誌] Yoshida H, Shiratori Y, et al.: "lFN therapy reduces the risk for HCC"Ann. lntern Med.. 131. 174-181 (1999)
• [文献書誌] Shiratori Y, Kato N, Yoshida H, et al.: "Sustained viral response is scarcely achieved in patients with high viral lood of HCV RNA by excessive lFN therapy"Dig Dis Sci. (in press).
• [文献書誌] Shiratori Y, YoshidaH, et al.: "Histologic improvement in fibrosis in hepatitis C patients with sustained response to lFN therapy"Ann. lntern Med.. (in press).