膵癌におけるp16遺伝子異常の検索と膵液を用いたその臨床的応用

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09670524
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 渡辺 弘之 金沢大学, がん研究所, 助手 (30242564)
• キーワード: p16mutations / 膵癌 / 免疫染色 / 膵液 / microdissection / homozygous deletion / PCR-SSCP

研究概要

私は、膵液中のK-ras変位の検索が膵癌診断い有用であることを報告してきたが、p53分析を加えても陽性率は100%になるわけではなく、さらに特異性の高い遺伝子を分析の対象に加えることが望まれる。p16は、cyclin dependent kinase(CDK)インヒビターをコードする癌抑制遺伝子として注目され、膵癌培養細胞株では高頻度に不活性化されていると報告されている。
手術ないしは剖検にて得られたヒト膵癌の組織において、p16モノクローナル抗体を用いた免疫染色により、膵癌組織のp16免疫染色低下すなわち蛋白発現の低下した領域をmicrodissection法にて病変を区分し、DNAを抽出した。p16の3つのエクソンに対応するプライマーを用いてPCRを行い、homozygous delectionの有無を判定した。膵癌26例エクソン1では5例(19.2%)に、エクソン2では6例(23.1%)にPCR産物の欠損が認められたが、エクソン3には認められず、合計すると26例中9例(34.6%)にhomozygous deletionが認められた。現在、DNAシークエンスでも確認中である。さらに、PCR産物が得られた17例については、PCR-SSCPによりp16の突然変異の有無を検索したが、明らかなmutationを認めたものはなかった。最近、p16蛋白発言低下の原因のひとつにCpGisland領域のmethy lationの関与が示唆されており、現在p16のmethylationについても検索中である。
一方、ヒト膵液中のp16変異の検討については、正常膵管上皮の剥離細胞成分が多量に含まれている膵液中では、homozygous deletionの検討は困難であることから、p16のmutationの有無につき制限酵素を用いた検討を行っている。
現在のところ、明らかなp16mutation陽性症例はみられていない。

研究成果

• [文献書誌] Hu Y-X et al.: "Frequent loss of p16 expression and its correlation with clinicopathological parameters in pancreatic carcinoma." Clin.Cancer Res.3・9. 1473-1477 (1997)
• [文献書誌] Hu Y-X et al.: "Infrequent expression of p21 is related to altered p53 protein in pancreatic carcinoma." Clin.Cancer Res.4・5. 1147-1152 (1998)
• [文献書誌] Watanabe H et al.: "Quantitative determination of K-ras mutations in pancreatic juice for diagnosis of pancreatic cancer using hybridization protection assay." Pancreas. 17・4. 341-347 (1998)
• [文献書誌] Taga H et al.: "Large duodenal tumor with positive K-ras mutation mimicking lateral spreading tumor of the colon." Dig.Endosc.11・1. 70-75 (1999)
• [文献書誌] Hu Y-X et al.: "Bcl-2 expression related to altered p53 protein and its impact on the progression of human pancreatic carcinoma." Br.J.Cancer. in press.
• [文献書誌] Yamaguchi Y et al.: "Detection of mutations of p53 tumor suppressor gene in pancreatic juice juice and its application to diagnosis of patients with pancreatic cancer-comparing with K-ras mutation." Clin.Cancer Res.in press.