| 研究概要 |
ハウスダスト感作アトピー型喘息患者末梢血単核球をハウスダスト抗原刺激にて一週間培養し,TRAPアッセイによりテロメラーゼ活性を半定量的に評価したところ,ハウスダスト感作喘息患者の約半数でメモリーTリンパ球分画のテロメラーゼ活性の増強を認め,それらは全例小児期にアトピー歴を有する患者であることが判明した。すなわち,抗原感作メモリーTリンパ球が長期にdonal expansionを繰り返してきたと考えられる症例では,増殖に伴うメモリーTリンパ球のテロメラーゼ活性増強能が高いことが予想された。
そこで,リンパ球におけるテロメラーゼ活性の抑制効果をみるため,テロメラーゼ逆転写酵素遺伝子の一部のアンチセンスPeptide nucleic acids(PNA)を作成し、EB virusで不死化したBリンパ球の細胞膜を処理した後に加え、1〜7日間培養した後TRAPアッセイにてテロメラーゼ活性を測定した。しかし,センス、アンチセンスのどちらのPNAを加えてもテロメラーゼ活性に変化は認められなかった。これはPNAがBリンパ球に十分取り込まれなかったためと考えられ,移入効率の向上の必要性が考えられた。
そこで、サイトメガロウイルスのプロモーターによってテロメラーゼ逆転写酵素遺伝子のアンチセンスを発現するアデノウイルスベクターを構築しテロメラーゼ活性を持つ癌細胞株、HeLa,LoVo,A549,SW403,VMRC-LCDの各々に感染させ、1〜7日間培養した後、生細胞率、テロメラーゼ活性を測定した。LoVo,VMRC-LCDにおいては生細胞率の低下を認めたがテロメラーゼ活性はどの細胞株においても変化を認めなかった。これは組み換えアデノウイルスの構造上の問題によるものと考えられ,構造の改善が今後の課題として残された。
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