1997 年度実績報告書

肺癌で欠失する癌抑制遺伝子産物を分子標的とした遺伝子治療

研究課題

研究課題/領域番号	09670615
研究種目	基盤研究(C)
研究機関	徳島大学
研究代表者	清水英治徳島大学, 医学部, 講師 (50187449)
研究分担者	山本晃義徳島大学, 医学部・附属病院, 助手 (60284288)
キーワード	肺癌 / 遺伝子治療 / p16 / RB / 癌抑制遺伝子 / 抗癌剤感受性試験 / コロニー形成試験
研究概要	p16を欠損する肺癌細胞培養株にpcDNAp16(p16cDNAの全長を含む)を、Rbを欠損する肺癌細胞培養株にpRC/CMVRb(rb cDNAの全長を含む)を、それぞれ、リポソームを用いて導入をした。いずれの細胞も野生型の癌抑制遺伝子産物を発現した。遺伝子産物の発現はtransfection後、2日目より3日目の間に最大発現となり、1週間後でも発現の持続がみられた。細胞の種類により異なるが、FACSを用いた検討ではp16は最大20%,最小1%の細胞に発現されていた。ウエスタンブロットによる検討ではtransfection後、2日目より脱リン酸化型のRB蛋白の増加が、電気泳動上でも、脱リン酸化型RB特異的抗体によっても確認された。可溶化したGST-p16を作製し、p16の定量実験系を確立した。感度は1mg細胞lysate当たり1pgであった。この系ではHeLa細胞、H209細胞、Ma-1細胞の内因性のp16発現量はそれぞれ、12、13、1pg/mg細胞蛋白であった。一方、pcDNAp16 transfection後2日目の外因性のp16発現量はMa-10で99pg/mg、Ma-2で345pg/mgと過剰発現がみられた。二重軟寒天培地を用いたコロニー形成試験の検討ではpcDNAp16をp16欠損肺癌細胞に導入することにより著明なコロニー数の減少がみられたが、p16を欠損していないHeLa細胞ではその減少がみられなかった。今後、抗癌剤との併用効果も検討した後に、癌性胸膜炎患者より胸水を採取し、癌抑制遺伝子の発現状態を検討し、臨床材料を用いたコロニー形成試験で各種遺伝子の導入効果を検討する予定である。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Yoshida,S., Shimizu,E., Sano,T., Uyama,T., Nakamura,Y., et al.: "Synchronous small cell carcinoma and adenocarcinoma of the lung representing different RB protein status" Int.J.Clin.Oncol.(in press).
[文献書誌] Yamamoto,T., Shimizu,E., Masuda,N., Takada,M.Sone,S.: "RB protein status and chemosensitivity in non-small cell lung cancers" Oncol.Rep.5. 447-451 (1997)
[文献書誌] Yamamoto,A., Shimizu,E., Sumitomo,K., Shinohara,A., et al.: "L-Myc overexpression snd detection of auto-antibodies against L-Myc in both the serum and pleural effusion from a patient with non-small cell lung cancer" Intern.Med.36(10). 724-727 (1997)
[文献書誌] Yoshida,S., Shimizu,E., Ogura,T., Takada,M.and Sone,S.: "Stimulatory effect of reconstituted basement membrane components(matrigel)on the colony formation of a panel of human lung cancer cell lines in soft agar" J.Cancer Res.Clin.Oncol.123(6). 301-309 (1997)
[文献書誌] Shimizu,E. and Sone,S.: "Tumor suppressor genes in human lung cancer" J.Med.Invest. 44(1,2). 15-24 (1997)
[文献書誌] Shimizu,E., Zhao,M., Shinohara,A., Namikawa,O., Ogura,T., et al.: "Differential expressions of cyclin A and RB protein in histological subtypes of lung cancer cell lines" J.Cancer Res.Clin.Oncol.123(10). 533-538 (1997)

1997 年度 実績報告書

肺癌で欠失する癌抑制遺伝子産物を分子標的とした遺伝子治療

研究代表者

清水 英治 徳島大学, 医学部, 講師 (50187449)

研究成果

[文献書誌] Yoshida,S., Shimizu,E., Sano,T., Uyama,T., Nakamura,Y., et al.: "Synchronous small cell carcinoma and adenocarcinoma of the lung representing different RB protein status" Int.J.Clin.Oncol.(in press).

[文献書誌] Yamamoto,T., Shimizu,E., Masuda,N., Takada,M.Sone,S.: "RB protein status and chemosensitivity in non-small cell lung cancers" Oncol.Rep.5. 447-451 (1997)

[文献書誌] Yamamoto,A., Shimizu,E., Sumitomo,K., Shinohara,A., et al.: "L-Myc overexpression snd detection of auto-antibodies against L-Myc in both the serum and pleural effusion from a patient with non-small cell lung cancer" Intern.Med.36(10). 724-727 (1997)

[文献書誌] Yoshida,S., Shimizu,E., Ogura,T., Takada,M.and Sone,S.: "Stimulatory effect of reconstituted basement membrane components(matrigel)on the colony formation of a panel of human lung cancer cell lines in soft agar" J.Cancer Res.Clin.Oncol.123(6). 301-309 (1997)

[文献書誌] Shimizu,E. and Sone,S.: "Tumor suppressor genes in human lung cancer" J.Med.Invest. 44(1,2). 15-24 (1997)

[文献書誌] Shimizu,E., Zhao,M., Shinohara,A., Namikawa,O., Ogura,T., et al.: "Differential expressions of cyclin A and RB protein in histological subtypes of lung cancer cell lines" J.Cancer Res.Clin.Oncol.123(10). 533-538 (1997)

1997 年度実績報告書

清水英治徳島大学, 医学部, 講師 (50187449)