心筋虚血時における興奮-収縮連関の異常に関する研究:特に筋小胞体の関与

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09670709
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 林 秀晴 浜松医科大学, 光量子医学研究センター, 助教授 (50135258)
• 研究分担者: 佐藤 洋 浜松医科大学, 医学部附属病院, 助手 (30293632) ; 寺田 肇 浜松医科大学, 医学部, 助手 (50252177)
• キーワード: 共焦点レーザー顕微鏡 / Ca^<2+> transient / fluo-3 / [Ca^<2+>]i / Na^+ / Ca^<2+>交換 / caffeine transient / 筋小胞体(SR) / pH低下

研究概要

共焦点レーザー顕微鏡(laser scanning confocal microscopy:LSCM)を用いてline Ca^<2+> transient(CaT)を解析した。モルモットの心室筋細胞に、fluo-3/AM(10μM)を30分間負荷し、fluo-3の蛍光は、LSCM(MRC600series)を用い、CaTや Ca^<2+> sparkの定量的解析には、line scan modeを使用した。confocal lineは細胞の長軸に沿ってセットされ、各々のlineは250Hzでscanされた。光量子増倍管から得られた蛍光強度のアナログ信号は256の白黒レベルにデジタル化され、line scan imageはpersonal computer上で、画像解析ソフトを用いたpseudo-ratio法によりCa^<2+>濃度として表現された。すなわち、|Ca^<2+>|i=Kd^*(F/FO)/|Kd/(|Ca^<2+>|
irest+1)-(F/FO)|、(Kd:fluo-3の解離定数=1.1μM、F:蛍光強度、FO:静止時の蛍光強度、|Ca^<2+>|irest=150nM)。方法論を確立したため、Na^+/Ca^<2+>交換によるCa^<2+>排出の活性を表すcaffeine transientのdecay phaseを電気刺激時と比較し、pH低下時のNa^+/Ca^<2+>交換によるCa^<2+>排出とSRのCa^<2+>-ATPaseによるCa^<2+>の取り込みを定量的に評価している。また、局所的で微細な|Ca^<2+>|i上昇(Ca^<2+> spark)の頻度や動態に及ぼすATP枯渇やpH低下の影響を調べて、虚血時時のCa^<2+>放出channel活性を評価中である。

研究成果

• [文献書誌] Hayashi H.et al: "Effects of γ-glutanyl cystelne ethyl ester on hoort metochondrial crcatin kinase activitys involvement of sulfhydryl groups." Eur.J.Pharmacol.349. 133-136 (1998)
• [文献書誌] Hayashi H.et al: "The relation between the action potential duration,the imrcas inresting tension and ATP content during metabolic inhibition" Mol.Cell.Biochem.(印刷中). (1998)
• [文献書誌] Watanabe H.et al: "An essential role of mijosin light-chain kinase in the regulation of agonist-and fluid-flow-stimulated Ca^+ inflex in endothelid cells" FASEB J.12. 341-348 (1998)
• [文献書誌] Katoh H.et al: "Heterogenetly and underlying mechnism for inotropic action of-endothelin-1 in rat ventricelar myocytes." Br.J.Pharmacol.123. 1343-1350 (1998)
• [文献書誌] Matsuno H.et al: "Multiple inhibition of plateled activation by aurintricarbonacada prevent,vascular stenosis after endotheliol injury in hamster carotid-artery" 79. 865-871 (1998)
• [文献書誌] Nakamura T.et al: "A single cell model of myocaldial reperfasion injury:changes in intracellular Na^+ and Ca^<2+> concentrations in guinea pig veutsccular mytomy" Mol.Cell.Biochem.(印刷中). (1998)
• [文献書誌] 林秀晴、佐藤洋: "L型カルシウムチャンネルとカルシュウム放出チャンネルの機能的相関" 循環器科. 44. 28-34 (1998)
• [文献書誌] Hayashi H et al.: "The Ischemic Heart" Kluwer Academic Pablishors,Boston, 295-301 (1998)
• [文献書誌] 林秀晴 他: "続 心臓代謝測定法" 六法出版社, 295-301,319-324,24-32 (1998)