肝を標的としたアンチセンス療法における脂質代謝改善及び動脈硬化抑制の研究

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09670727
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 菅野 公浩 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (20206395)
• 研究分担者: 平山 祐義 九州大学, 生体防御医学研究所, 医員 ; 畑 知ニ 九州大学, 生体防御医学研究所, 講師 (90198739)
• キーワード: antisense oligodeoxymodaotides / 動脈硬化 / コレステロールエステル転送蛋白(CETP) / アンギオテンシノーゲン / 肝

研究概要

まずコレステロールエステル転送蛋白(CETP)アンチセンス療法が、動脈硬化の進展に対する有効性を研究した。(方法)日本白色家兎(n=18)を0.3%chol食で8週飼育し、CETPantisense ODNs投与群(A群)、CETP sense ODNs投与群(S群)、無投与群(C群)の3群に分け、16週まで飼育した。CETP ODNsはasialogycoprotein-poly(L)lysineにcouplingして投与した。(結果)A群においてODNs投与後、2週より血清CETPmass、血清総cholは、S群、C群と比して、有意に低下していた。血清HDL-cholは、16週で、A群でS群、C群より有意に高かった。A群ではS群、C群と比して、肝CETPmRNAは低下し、肝LDL receptor mRNAは増加していた。動脈内chol含量及びプラークの大動脈総面積に対する%は、A群ではS群、C群と比して、有意に低下していた。(結論)CETP antisense ODNs投与は、血清VLDL 及びLDLchOlを低下させ、動脈硬化の進展を抑制することがことが示唆された。つぎに肝特異的レセプターを介してCETP antisense ODNsを肝細胞に投与し、肝のCETPmRNAの低下が肝のApo A-I産生に与える影響について検討した。(方法)Hep G2 cellを培養し、CETP antisense ODNs (A-ODNS)、CETP sense ODNs(S-ODNs)添加群の2群に分けた。2日間培養後、培地よりCETPおよびApo A-I量、prebeta HDLについてはimmunoblotting及びnonSDS-PAGE後にWestem blotingにて測定した。細胞よりCETP、Apo A-I mRNAを測定した。(結果)A-ODNs添加群ではS-ODNs添加群と比して、培地のCETP量は有意に減少し、ApoA-I量は有意に上昇した。Apo A-Iの増加は、特にprebeta HDLの増加によるものであった。(結論)肝ではCETP産生の抑制により、antiatherogenicなprebeta HDLの産生の分泌が増加することが示唆された。本遺伝子導入法により、CETP以外にも、肝で合成されるアシギオテンシノーゲンの遺伝子レベルでの調節により、高血圧の治療並びに病態の解明についても研究した。

研究成果

• [文献書誌] Masahiro Sugano,Naoki Makino,Takashi Yanaga: "Effect of Dietary Omega-3 Eicosapentaenoic acid Supplements on Cholesteryl ester Transfer from HDL in Cholesterol-fed Rabbits" Biochimica et Biophysica Acta. 1346. 17-24 (1997)
• [文献書誌] Naoki Makino,Masahiro Sugano,Shoji Otsuka,Tomoji Hata: "Molecular Mechanism of Angiotensin II Type I and Type II Receptors in Cardiac Hypertrophy of Spontaneously Hypertensivr Rats" Hypertension. 30. 796-802 (1997)
• [文献書誌] Masahiro Sugano,Naoki Makino,Takashi Yanaga: "Effects of Hepatic HDL-related mRNAs on Plasms Prebeta HDL in Cholesterol-fed Rabbits" Artery. 22(4). 182-205 (1997)
• [文献書誌] Sugano M,Makino N,Sawada S,Otsuka S,Watanabe M,Okamoto H,Kamada M,Mizushima A: "Effect of Antisense Oligodeoxynucleotides against Cholesteryl Ester Transfer Protein on the Development of Atherosclerosis in Cholesterol-fed Rabbits" J.Biol Chem.273. 5033-5036 (1998)
• [文献書誌] Makino N,Sugano M,Sawada S,Otsuka S: "Intravenous Injection with antisense Oligodeoxynucleotides against Angiotensinogen decreases Blood Pressure in Spontaneously Hypertensivr Rats" Hypertention. 31. 1166-1170 (1998)
• [文献書誌] Otsuka S,Sugano M,Makino N,Sawada S,Hata T,Niho Y: "Interaction of mRNAs for Angiotensin II Type 1 and Type 2 Receptors to Vascular Remodelling in Spontaneousuly Hypertensive Rats" Hypertension. 32. 467-472 (1998)