| 研究概要 |
1.microplate reader(MPR)を用いた酵素活性測定法は少量の検体量、大量の検体処理等の利点がありミトコンドリア機能検査への応用が期待される。(1)筋組織から分離精製したミトコンドリアからMPRを用いて電子伝達系複合体II-IIIに続きI、IV測定法を開発した。現在、正常対象の酵素活性を測定し再現性を検討している。(2)血液より分離した血小板からMPRを用い、複合体II-III、IVの測定法を開発した。現在、正常対象の酵素活性を測定し再現性を検討している。複合体I測定法は検討中である。又、ミトコンドリア脳筋症での複合体各酵素活性を測定中である。(3)MPRを用いて血清free,total carnitine(Car)および血小板free Car測定法を開発した。Car欠損症の症例にL-Carを急性期、回復期に点滴静注投与し、急性期には血小板free Carの上昇が認められずcarnitine transporterの障害が示唆された。Reye-like症候群の急性期にも血小板free Carは低下しておりcarnitine transporterの障害が示唆された。今後、ミトコンドリア障害の症例のCar測定法を行う予定である。
2.患者に投与しているcytochrome cの至適投与量を検討するため血清中の微量cytochrome c含量測定法の開発を目指した。cytochrome F,CoQ-cytochrome c reductaseを用いたcycling法を現在開発中である。
ミトコンドリア病患者、健常者から血小板、白血球を分離精製し液体窒素保存し約200検体を蓄積している。更に蓄積予定である。また、細胞培養におけるミトコンドリア活性化の検討を目指し、ミトコンドリア病患者の繊維芽細胞培養を蓄積している。今後、ミトコンドリア活性化の検討のため、培養細胞におけるミトコンドリア機能評価をNMR specrometer、ミトコンドリア電子伝達系酵素、およびCar測定など用いて確立する予定である。
PCRを用いてミトコンドリアDNA(mtDNA)のpoint mutation、deletationを検討を目指し、本年度は、np3243,8344,8356,8993変異の同定を修得した。今後SSCP、血小板のmtDNAを検討する予定である。
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