| 研究概要 |
ビタミンDによる転写抑制を媒介するDNA配列として,DR3型の半分の配列様のDNA配列nVDRE _<PTH>が、ヒトPTH遺伝子においで同定された。我々は、PTHrP遺伝子が発現されているヒトT細胞性リンパ腫MT2細胞株において、ビタミンDがPTHrP遺伝子の転写抑制を惹起するという報告に注目し、nVDRE _<PTH>相同配列をヒト及びラットのPTHrP遺伝子上流に見い出した(nVDRE_<RP>)。nVDRE _<RP>類似配列は,種を超えて,ビタミンDによって抑制される遺伝子上流に見い出されたことから、nVDRE配列を介するビタミンDによる転写抑制機構が普遍的にみられるものと考え、この配列nVDRE _<RP>を用いて、MT2細胞核蛋白との結合実験および同細胞への発現実験を行い、以下の知見を得た。1)nVDRE _<RP>にモノマーのVDR(ビタミンD受容体)は結合するがRXR(レチノイン酸X受容体)は結合しない。
2)nVDRE _<RP>はビタミンDによるレポーター遺伝子活性抑制に必要である。3)ゲルシフト及びアンチセンス遺伝子の発現実験によると、nVDRE _<RP>にはKu抗原も結合する。Ku抗原は調節ユニットのDNA結合を通じて、触媒ユニットのDNA依存性蛋白キナーゼ(DNA-PK)が活性化されることが知られている。4)大腸菌で精製したVDRをKu抗原(+DNA-PK)は燐酸化する。5)VDRのDNA-PKによる燐酸化がnVDRE _<RP>とMT2核蛋白結合を滅弱させる。6)MT2以外の細胞でも、VDR導入によりこれらの現象が再現される。以上の結果より、ビタミンDはモノマーのVDRに結合することによっておそらくアロステリックにVDRの構造を変え、この燐酸化を受け易くすることによってNVDRE _<RP>との結合を弱める結果、ビタミンDによる転写抑制につながると考えられ、この機構の普遍性が示唆された。
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