分子生物学的手法による悪性褐色細胞腫の早期診断に関する研究-癌抑制遺伝子p53の変異と微小転移からの検討

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09671075
• 研究機関: 東京女子医科大学
• 研究代表者: 成瀬 光栄 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (40120018)
• 研究分担者: 西川 俊郎 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (50120019)
• キーワード: 褐色細胞腫 / 悪性褐色細胞腫 / 早期診断 / 癌抑制遺伝子 / p53蛋白 / 副腎皮質腫瘍

研究概要

[日的]癌抑制遺伝子であるp53の変異は種々の臓器における腫瘍の発生や進展、多発化などとの関連が報告されており、悪性度や予後の指標としても有用であると考えられている。我々は既に褐色細胞種の腫瘍組織において、p53の遺伝子配列を検討した結果、悪性例、多発例においてp53の点変異を見いだした。そこでこの点変異が副腎髄質に特異的が否がを明らかにするため、副腎皮質腫瘍においても同様の検討を行った。
[方法]原発性アルドステロン症17例、副腎性クッシング症候群12例の凍結標本からDNAを抽出、PCR-SSCP法にてp53遺伝子exon4-9の変異の有無をスクリーニングした。p53遺伝子各exon4〜9をα-32P-dCTP存在下でPCR増幅。exon4は長いため前半(4-1コドン33〜100)と後半(4-2:コドン73〜125)に分けてPCRを施行した。PCR産物を一本鎖DNAに変成させ5%グリセロール含有の5%ポリアクリルアミドゲルにて35W、20C、3時間電気泳動後、オートラディオグラフィーを施行した。
[結果]昨年度報告した褐色細胞腫での結果とは対照的に17例の原発性アルドステロン症、12例の副腎性クッシング症候群の腫瘍組織では53遺伝子の変異は認められなかった。従来の報告と一致してp53遺伝子のコドン72にproline(CCC)とarginine(CGC)の遺伝子多型を認めたが、褐色細胞腫、原発性アルドステロン症、クッシング症候群の3種類の副腎腫瘍組織間で本多型の頻度には差を認めなかった。
[結論]悪性および多発性褐色細胞腫において認められたp53遺伝子の変異は、副腎皮質腫瘍では全く認められず、髄質腫瘍に極めて特異性の高い遺伝子変異である事が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Yoshimoto T.: "The relatively high frequency of p53 gene mutation in multiple and malignant pheochromocytoma in Japanese and Chinese patients" J.Endocrinol.159. 247-255 (1998)
• [文献書誌] Yoshimoto T.: "Poteutiation of natriuretic peptide action by β-adrenergic blocker carvedilol in hypertensive rats: a new autihypertensive mechanism" Endocrinology. 139. 81-88 (1998)
• [文献書誌] Tanabe A.: "ET-1 and eNOS gene expression in the cardiovascular tissuer of SHRSP/Izm : effect of angiotensin converting enzyme inhibitor aracepril." J.Cardiovasc. Pharmacol.31. S395-S398 (1998)
• [文献書誌] Naruse M.: "Differential rolen of angiotensin receptor subtypes in adrenocortical function in mice." Life Sci.63. 1593-1598 (1998)
• [文献書誌] Tanabe A.: "Angiotensin II stimulates both aldosterone secretion and DNA synthesis via type 1 but not type 2 receptors in bovine adrenucortical cells." J.Endocrinol. Invest.21(in press). (1998)
• [文献書誌] Ogata M.: "Immunoreactive endothelin levels in the Vitreous fluid are decrecised in diabetic patients with proliferative retinopathy." J. Cardiovasc. Pharmacol.31. S378-S379 (1998)