組織因子遺伝子のメチル化/脱メチル化による発現制御機構と血球分化

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09671108
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 中村 伸 京都大学, 霊長類研究所, 助手 (10101255)
• 研究分担者: 和田 英夫 三重大学, 医学部, 助手 (40158704)
• キーワード: 組織因子 / Tissue Factor / メチル化 / 脱メチル化 / 遺伝子発現調節 / mRNA発現 / 細胞分化 / テストステロン / 精嚢

研究概要

本研究では正常血液細胞ならびに種々がん細胞でのTF遺伝子の発現特性とプロモーター領域CpG島のメチル化/脱メチル化との関連を調べ、メチル化によるTF遺伝子の転写制御機構を究明する。また、TF遺伝子のメチル化/脱メチル化とその発現調節への影響を解析し、細胞の分化や脱分化・ガン化とTF遺伝子発現のメチル化制御機構との関わりについても検討する。この研究目的に従って以下の研究を展開した。
1. 正常な組織・細胞、種々の白血病細胞や関連のがん細胞でのTF-mRNA発現量を定量的に測定するための特異的プライマー設計とそれを用いた定量的RT-PCR法(competitive RT-PCR;C-RT-PCR)を確立した。また、これら細胞で発現されるTFタンパク質を定量比較するための、高感度サンドイッチELISA法およびフローサイトメトリーも確立した。
2. サル正常組織・細胞ではオス精嚢でのテストステロン依存的なTF遺伝子の発現機構が見出された。特に、生殖組織・細胞ではメチル化/脱メチル化による特定遺伝子の発現制御が知られており、精嚢でのTF遺伝子発現制御にメチル化/脱メチル化が関わっていることが示唆された。また、種々のがん細胞ではがん化に伴いTFの発現性はmRNAおよびタンパク質レベルで異常亢進していることが明らかになり、メチル化/脱メチル化異常との関連が窺える。さらに、正常白血球の内、単球および好中球はTF発現性を示すが、リンパ球ではTF発現能が見られず、これら正常白血球におけるTF遺伝子の発現制御には細胞分化特異的なメチル化/脱メチル化の関与が示唆された。
3. 白血病細胞、がん細胞細胞、正常白血球でのTF発現性とメチル化/脱メチル化発現制御機構との関連を詳しく解析するために、TE遺伝子のメチル化領域をPCR増幅するための特異的PCR法を開発し、そのDNA断片の増幅条件を検討し、TF遺伝子のCpG島メチル化サイトの特定ならびにhypo-あるいはhyper-methylationとTF遺伝子の発現調節との関連を検討している。

研究成果

• [文献書誌] R.Watanabe,et al.: "Long-Term Follow-up of Hemostatic Molecular Markers during Remission Induction Therapy with All-trans Retinoic Acid for Acute Promyelocytic Leukemia" Thromb.Haemost.77. 641-645 (1997)
• [文献書誌] K.Kaikita,et al.: "Tissue Factor Expression on Macrophages in Coronary Plaques in Patients with Unstable Angina." Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.17. 2232-2237 (1997)
• [文献書誌] Y.Hirashima,S.Nakamura: "Cerebrospinal Fluid Tissue Factor and Thrombin-Antithrombin III Complex as Indicators of Tissue Injury after Subarachnoid Hemorrhage" Stroke. 28. 1666-1670 (1997)
• [文献書誌] H.Suefuji,et al.: "Increased Plasma Tissue Factor Levels in Acute Myocardial Infarction" Am.Heart J.134. 253-259 (1997)
• [文献書誌] J.M.Morrissev.et al.: "CD142(tissue factor)Workshop panel report" Leukocyte Typing IV,White Cell Differentiation Antigens. 742-746 (1998)
• [文献書誌] Y.Matsumoto,et al.: "Fluid Shear Stress Attenuates Tumor Necrosis Factor-Induced Tissue Factor Expression in Cultured Human Endothelial Cells" Blood. 91. 4164-4172 (1998)