| 研究概要 |
【目的】
慢性骨髄性白血病において、転座により新たに生じたペプチドを含むBCR-ABLキメラ蛋白が腫瘍抗原の候補の一つとして考えられている。このキメラ蛋白はHLA class Iとのbinding assayにて、HLA-A3,A11,B8との高い親和性が証明されている。HLA-A3,B8は日本人には、ほとんど存在しないため、HLA-A11に親和性のあるキメラ蛋白について樹状細胞を用い、in vitroで抗原特異的な細胞障害性T細胞を誘導する。
【方法】
HLA A11健常人ドナーの末梢血CD14陽性細胞より、GM-CSF+IL-4+TNF-αを用い、樹状細胞を分化誘導する。BCR-ABL(b3a2)mRNA由来peptide(ATGFKQSSK,HSATGFKQSSK)をパルスした、この樹状細胞を、CD8陽性自己T細胞と共培養する。その後、IL-7+IL-10+IL-2を用い、7日毎に同peptideをパルスした自己末梢血単核球細胞と共培養とする。慢性骨髄性白血病株K562(BCR-ABL(b3a2)陽性、HLAA1101)、同peptideをパルスした自己EB virus transformed B cell lineをtarget cellとして、^<51>Cr assayを行う。このassayで、抗原特異的なwellを選び、クローニングを行う。
【結果】
樹状細胞の同定は、9日間培養後、位相差顕微鏡、May-Giemsa染色、免疫染色(CD1a,S-100蛋白)、フローサイトメトリー(CD83,CD80,CD86,CD1a,CD40,CD54,CD58,HLA-class I,HLA-DR,etc.)、KLH、Tenanus toxoidに対する一次、二次免疫応答の誘導により確認した。現在、上記方法により抗原特異的なwellを選択中である。
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