| 研究課題/領域番号 |
09671132
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
三室 淳 自治医科大学, 医学部, 講師 (10221607)
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| 研究分担者 |
坂田 洋一 自治医科大学, 医学部, 助教授 (40129028)
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| キーワード | Plasminogen activator inhibitor / gene targeting / fibrinolysis |
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| 研究概要 |
マウスembryonic stem(ES)ce11 line CGR8にマウスPAI-2 targeting vector をelectroporation法を用いて導入し、スクリーニング後にPAI-2 geneのhomologous recombinationを認めたクローンを確立した。えられた2 cloneのES細胞をマウス胚細胞にblastcystoinjectionにより導入し、さらに偽妊娠マウスの子宮に移植した。その結果、キメラマウスを得ることに成功したが、germ line transmissionの不成立などにより、CGR8 ES細胞をもちいたPAI-2 knock out mouseを確立できなかった。そこで、別のES cell line E14tg2aをもちいてあらたにPAI-2 geneの targetingを行った。targeting vectorには2種類のconstructをもちいた。PAI-2 geneのexon IIを欠失するtargeting vectorではhomorogous recombinationをのあるcloneはえられなかったが、exon V〜VIIIを欠失するtargeting vectorをもちいたところ、550 cloneのうち3 clone(#206、#377、#550)においてPAI-2 geneのhomologous recombinationを認めた。これらcloneのES細胞を再度マウス胚細胞にblastcystoinjection法により導入し、さらに偽妊娠マウスの子宮に移植した。キメラマウスの有無、またgerminal transmissionを検討中である。今後はさらに、交配によりPAI-2 knock out mouseを確立し解析をすすめ、PAI-2の生体内における機能について解析する予定である。
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