| 研究概要 |
哺乳動物ではいくつかのNa/H交換輸送体(Na/H exchanger,NHE)がクローニングされているが、その内で上皮細胞においてはamiloride高感受性のNHE-1は基底側膜にamiloride低感受性のNHE-3は管腔側に発現していると一般的に考えられているが、特に外因性NHEをtransfectした場合必ずしも意見の一致をみていない。また腎上皮由来のLLC-PK1細胞において、管腔側にNHE活性が存在するかについても意見の一致をみていない。そこで私たちは、collagenでcoatしたfilter上に培養した腎尿細管由来LLC-PK1細胞の内因性NHE-1活性をBCECFを用いて検討し、管腔側にもNHE活性が存在することを明らかにした。管腔側NHEは基底側膜NHEよりamiloride感受性が低く、またNHE-1 cDNAに対するアンチセンスオリゴをtransfectさせると基底側膜NHE活性のみが低下したことから、LLC-PK1細胞の内因性NHEの内基底側膜のもののみがNHE-1であると結論した。またNHE-3のみが発現しているOK細胞に、metallothionein promoterの制御下に挿入したヒトNHE-1 cDNAをtransfectし、Zn^<++>により急性誘導すると、NHE-1由来と考えられるamiloride高感受性のNHE活性は基底側に発現すると思われる結果を得ている。現在NHE-1の細胞外部分に9個のアミノ酸からなるepitopeをつけたヒトNHE-1 cDNAの作成が進行中である。
|
