| 研究課題/領域番号 |
09671183
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
土谷 健 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (00246472)
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| 研究分担者 |
横山 尚彦 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (70191525)
望月 俊雄 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (00277120)
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| キーワード | 嚢胞腎 / トランスジェニックマウス / Na / K ATPase |
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| 研究概要 |
挿入変異により生じた左右内蔵逆位、嚢胞形成腎を有するトランスジェニックマウスの組織学的、分子生物学的検討をおこなった。
1)候補遺伝子の決定
マウス胎児ライブラリーを挿入geneをマーカーとしてスクリーニングすることにより、転写領域の全長のcDNAをクローニングすることに成功した(投稿中)。細胞質内に局在する蛋白をcodingする可能性が考えられた。臓器別のmRNAの発現についてNorthern解析を行ったが、心臓、肝臓、腎臓でのシグナルが強陽性であった。発達学的には、胎生3日以降の発現が確認された。
全長cDNAの塩基配列およびアミノ酸配列が決定されたため、そのhomology検索を行うとともに、アミノ酸配列を基に抗体の作製を開始した。
また、得られたマウスのクローンをprobeとして、ヒト腎ライブラリーをスクリーニングし、homologueを得た。今後、ヒト遺伝子cDNAの全長を決定する予定である(分担者 望月)。
全長cDNAをexpression vectorにサブクローニングし、今後、gene rescueを行い、形質の発現と本geneの直接的な関係を証明する予定である(分担者 横山)。
2)嚢胞腎の組織学的検討
胎生20日のhomozygoteの個体の腎の組織標本を作製した。嚢胞は主として遠位部尿細管を中心に形成されていた。電子顕微鏡的にも上皮細胞の偏平化、核の位置異常、microvilliの減少が観察された。膜蛋白であるNa/K ATPaseの免疫組織学的検討では、alpha,beta両subunitの染色性が、嚢胞の形成、進展とともに弱まっていくことが確認された。現在、他の膜蛋白の局在、細胞外基質などの染色を行っている。今後、特異的抗体が作製されれば、その染色性も確認する予定である。
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