研究概要 |
CMV特異的CTLを誘導し、limiting dilusion法でCMV pp65特異的CLTクローンを樹立した。樹立したCTLクローンは、HLA B35拘束性CMV pp65特異的CTLクローンであった。このCTLがClass I拘束性に認識するpeptideをmappingするため,pp65をN末端より100アミノ酸ごと制限酵素でtruncateしたmutation formを作り、vaccinia virusのvectorであるpSC11MCSにligateし種々のrVacをhomologous recombinationで樹立し,full length(606)-pp65 rVac、458(Not I site)-pp65r Vac、383(Hind III site)-pp65 rVac、316(Sma I site)-pp65r Vac、225(BstEII site)-pp65r Vac、122(BsrBI site)-pp6 rVac、0-pp65 rVacを樹立した。また、T7 tag認識シークエンス(ATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGT)を組み込み、樹立したrVacのタンパク発現をT7 tag抗体を用いWestern blotting法で確認した。 これらpp65mutated rVacを自己LCLに感染させたものをtargetとして,CTL cloneを用いてpeptideのmappingを施行した。すなわち,N末端より225までtrancateしてもCTLの細胞障害活性は消失しなかったが,122までtrancateすると細胞障害活性は消失することより,responsible elementはN末端から122から225までに存在することが解明できた。
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