| 研究課題/領域番号 |
09671280
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
小林 進 千葉大学, 医学部・附属病院, 講師 (50234828)
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| 研究分担者 |
今関 英男 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (60272308)
白澤 浩 千葉大学, 医学部, 教授 (00216194)
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| キーワード | p16 / アデノシルスベクター / 遺伝子導入 / 膵癌 |
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| 研究概要 |
p16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターの作製
先ず、東京大学医科研、斎藤泉先生より御供与いただいたアデノウイルス発現ベクターによりp16^<INK4a>発現ベクターを作製した。詳細は以下の如くである。すなわち、開始コドン前約10塩基、終止コドン後約30塩基をつける形で組み込むべきp16^<INK4a>cDNA(0.8kb)をPCR cloningにより、cloningした。これをコスミッドカセットDNAのSwa-1 siteにIn vitro pachage法により組み込み、されに、これをEco T221にて切断された親アデノウイルスとと293細胞にco-transfectし、組換えウイルスを分離しp16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターを作製した。
p16^<INK4a>mRNA発言の確認(In vitro)
p16^<INK4a>のhomozygous deletionが確認された膵癌培養細胞株;MIAPaca-2 に対し、上記のp16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターによりp16^<INK4a>遺伝子導入を行った。これよりmRNA抽出し、Northern,Western Blot Hybridizationを行ったが、実際にp16^<INK4a>遺伝子導入されたMIAPaca-2にp16^<INK4a>のmRNAの高度の発現が見られることを確認した。
p16^<INK4a>発現による膵癌細胞増殖抑制効果
遺伝子導入によりp16^<INK4a>発現が確認された膵癌培養細胞株;MIAPaca-2とコントロールとしてのアデノウイルス添加されたMIAPaca-2の細胞増殖曲線を比較したがp16^<INK4a>発現によりMIAPaca-2の細胞増殖は有意に抑制された。
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