| 研究概要 |
p16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターの作製
先ず、東京大学医科研、斎藤泉先生より御供与いただいたアデノウイルス発現ベクターによりp16^<INK4a>発現ベクターを作製した。詳細は以下の如くである。すなわち、開始コドン前約10塩基、終止コドン後約30塩基をつける形で組み込むべきp16^<INK4a> cDNA(0.8kb)をPCR cloningにより、cloningした。これをコスミッドカセット DNAのSwa-1 siteにIn vitro pachage法により組み込み、さらに、これをEco T22Iにて切断された親アデノウイルスと293細胞にco-transfectし、組換えウイルスを分離しp16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターを作製した。
p16^<INK4a> mRNA発現の確認(In vitro)
p16^<INK4a>のhomozygous deletionが確認された膵癌培養細胞株 ; MIAPaca-2に対し、上記のp16^<INK4a> 発現アデノウイルスベクターによりp16^<INK4a> 遺伝子導入を行った。これよりmRNA抽出し、Northern,Western Blot Hybridizationを行ったが、実際にp1p16^<INK4a> 遺伝子導入されたMIAPaca-2にp16^<INK4a> のmRNAの高度の発現が見られることを確認した。
p16^<INK4a> 発現による膵癌細胞増殖抑制効果
遺伝子導入によりp16^<INK4a> 発現が確認された膵癌培養細胞株 ; MIAPaca-2とコントロールとしてのアデノウイルス添加されたMIAPaca-2の細胞増殖曲線を比較したがp16^<INK4a> 発現によりMIAPaca-2の細胞増殖は有意に抑制された。
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